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目的:
本研究主要对高压氧(Hyperbaric Oxygenation,HBO)单次持续9小时方案超早期治疗永久性大脑中动脉阻塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)大鼠的疗效进行评估,并对高压氧治疗(Hyperbaric Oxygenation Therapy,HBOT)的相关机制进行初步探讨。
材料与方法:
(1)模型制作及分组:利用线栓法制作雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠永久性MCAO模型,再分别随机分为:缺血对照组(MCAO control group,MCAO)、缺血治疗组(HBO therapy group,HBOT),并设立伪手术组(sham control group,sham)、伪手术高压氧治疗组(sham therapy group,sham-HBOT)对照,各组又随机分为13h和5d亚组。
(2)高压氧治疗方案:sham-HBOT组、HBOT组动物于模型制备成功后3h开始高压氧治疗(HBOT)。治疗压力为2个绝对大气压(Atmosphere Absolute,ATA)。升压20分钟,稳压9小时,减压40分钟。大鼠分别于第1、3、5、7、9h呼吸纯氧,第2、4、6、8h呼吸舱内高压空气。假手术组、MCAO组大鼠于模型制成后,呼吸常压空气。
(3)观察指标测定:①死亡率:实验过程中记录各亚组于缺血后13h、24h、48h、3d、5d死亡率;②神经功能评分:采用Bederson、Garcia两种评分系统在3h、13h、24h、3d、5d对大鼠行为学进行评价;⑧脑梗死体积:于缺血后13h、5d取材,对脑组织进行TTC染色后测定各组脑梗死体积;④血管内皮生长因子的表达:于缺血后13h、5d取材,脑组织冰冻切片后行免疫组织化学染色测定各组脑组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况。
结果:
(1)HBOT组13h、5d时死亡率较MCAO组降低,死亡高峰时段后移,死亡高峰持续时间缩短。
(2)神经功能评分显示随时间推移,各亚组大鼠行为学均有改善。13h各亚组内评分比较,Bederson评分改善无统计学意义(P>0.05),Garcia评分改善有非常显著统计学差异(P<0.01)。MCAO组与HBOT组进行组间比较,HBOT组行为学改善较MCAO组更明显,但Bederson评分改善无统计学意义(P>0.05),Garcia评分改善有显著统计学差异(P<0.05)。5d各亚组大鼠在13h神经功能即有明显改善(P<0.01),组间比较,除3d时间点外,HBOT组恢复更明显一些,但无统计学差异(P>0.05)。
(3)MCAO组大鼠5d时脑梗死体积较13h时增大(P<0.05),HBOT组较MCAO组5d时梗死体积缩小,有显著统计学差异(P<0.05)。
(4)MCAO组和HBOT组13h时VEGF均有明显表达,两组间差异无统计学意义(P>0.05),但MCAO组5d时VEGF表达较13h时明显减少(P<0.01),而HBOT组5d时VEGF表达明显高于13h,而且显著高于MCAO组5d水平(P<0.01)。
结论:
(1)单次持续9h HBOT方案超早期干预降低了MCAO大鼠的死亡率,改善神经功能缺损,使脑梗死体积缩小,初步显示了疗效,但有效性还需进一步证实。
(2)通过刺激内源性VEGF生成,以达到促进缺血后新生血管的形成,改善缺血组织的灌注及其直接的神经保护可能是HBOT治疗脑梗死的机制之一。