【摘 要】
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芽胞杆菌属(Bacillus)是一类低G+Cmol%含量的产生芽孢的革兰氏阳性细菌,属于厚壁菌门(Firmicutes),芽胞杆菌纲(Bacli),芽胞杆菌目(Bacllales),广泛存在于自然界中。本研究完
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芽胞杆菌属(Bacillus)是一类低G+Cmol%含量的产生芽孢的革兰氏阳性细菌,属于厚壁菌门(Firmicutes),芽胞杆菌纲(Bacli),芽胞杆菌目(Bacllales),广泛存在于自然界中。本研究完成了一株芽胞杆菌新菌株的分离与鉴定,重点研究了分离菌株的抗肿瘤活性,初步分离得到了该菌株产生的抗肿瘤活性物质并进行了质谱鉴定。从湖南区域采集的土样中采用逐步稀释划线法分离得到了 127个菌株,并筛选到了1株具有抗肿瘤活性的芽胞杆菌,研究了其最适生长温度、耐盐性等生长特性。通过对该菌株的菌落形态观察、镜检、生理生化鉴定以及16S rRNA基因测序,结果表明该菌株属于短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus),命名为Bacillus pumilus BHS-2。并将16SrRNA基因序列提交到GenBank(登录号KC675187)。通过MTT实验发现,该菌株在LB培养基中培养60h后的上清液对小鼠黑色素瘤B16细胞和宫颈癌HeLa细胞具有较好的抑制效果。使用Superdex 200葡聚糖层析柱、HPLC和UHPLC分离得到2个抗肿瘤活性物质BP60-1和BP60-2。通过质谱鉴定表明,BP60-1和BP60-2的分子量分别为269.86和250.02,推测为稠环化合物。通过免疫荧光检测,发现该活性物质能造成小鼠黑色素瘤B16细胞和宫颈癌HeLa细胞的微管解聚,对细胞核和线粒体基本没有影响。从观察结果认为,从BHS-2新菌株分离得到的活性物质对肿瘤细胞的作用靶点为微管。该活性物质的分子结构初步进行了核磁共振测定,其分子结构的精确确定还有待进一步研究。
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