【摘 要】
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水稻白叶枯病(Bacterial Blight of Rice)是水稻(Oryzae sativa)上最重要的病害之一,它是由水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)引起的。水稻白叶枯菌(Xoo)从
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水稻白叶枯病(Bacterial Blight of Rice)是水稻(Oryzae sativa)上最重要的病害之一,它是由水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)引起的。水稻白叶枯菌(Xoo)从被发现至今100多年的历史中,一直是植物病理学研究者关注的焦点。研究水稻抗病基因(R)和Xoo无毒基因(A)的互作是阐明抗病基因和Xoo的致病性分化、鉴定小种、无毒基因、致病基因等的基本依据,也是发展有效的病害防治措施的需要。因此,研究水稻白叶枯病菌的无毒基因,将有助于鉴定和克隆水稻的抗病基因,进一步明确无毒基因与抗病基因互作的分子机制。
Xoo中已克隆的avr基因有avrXa7、avrXa10、avrXa3、avrXa27和avrxa5,而本实验室筛选到一个弱毒性的菌株OS-198可能含有新的无毒基因,为此提取了OS-198的总DNA,经EcoRI部分酶切后,回收23-48.5Kb的片段,连接到用EcoRI完全酶切,去磷酸化的粘粒载体pUFR034上。用包装蛋白将上述连接混合物包装后,吸附到宿主菌S17-1中,构建了OS-198的基因组文库。
Xoo基因组中存在着众多的avrBs3/pthA家族基因,为了了解这些基因在OS-198基因组中的存在特点,本实验利用来源于水稻白叶枯病菌菌株JXOⅢ的2.67Kb的无毒基因avrXa3重复区的1.4kb-SphⅠ片段作探针检测OS-198基因文库,通过斑点杂交及Southern杂交,将所得结果进行归类和分析,从64个阳性克隆中鉴定出15个不同的阳性克隆,它们在基因组中单独存在,或2个和2个以上串联排列。为今后进一步研究OS198的avrBs3/pthA家族基因提供了基本信息。
将800个OS-198/pUFR034文库的克隆用两型交配法逐一导入PXO99A中,得到的结合子和野生型菌株一起接种苗期水稻近等基因系,发现7个克隆导入受体菌后病斑长度与PXO99A差异显著。其中克隆592和519,377在水稻IRBB8和IRBB2,IRBB7上产生类似HR的反应,为将来进一步发掘OS-198中新的无毒基因提供了基础。
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