【摘 要】
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油菜根肿病是由芸薹根肿菌（Plasmodiophora brassiae Woron）侵染引起的一种土传病害。我国油菜主要种植区根肿病均有发生,且发生面积呈逐年上升趋势,成为限制油菜生产的主要病害之一。本研究对湖南地区种植的油菜品种开展了抗病性鉴定,并应用实时荧光定量PCR和LAMP检测法对土壤中根肿菌进行了定量和快速检测,主要研究结果如下。1、对适宜湖南地区种植的50个油菜品种,分别采用温室人工
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油菜根肿病是由芸薹根肿菌（Plasmodiophora brassiae Woron）侵染引起的一种土传病害。我国油菜主要种植区根肿病均有发生,且发生面积呈逐年上升趋势,成为限制油菜生产的主要病害之一。本研究对湖南地区种植的油菜品种开展了抗病性鉴定,并应用实时荧光定量PCR和LAMP检测法对土壤中根肿菌进行了定量和快速检测,主要研究结果如下。1、对适宜湖南地区种植的50个油菜品种,分别采用温室人工接种和田间自然诱发鉴定两种方法进行了抗性鉴定。综合两种方法的鉴定结果来看,对根肿病菌表现抗病（病情指数＜20）的品种有12个,占供试品种的24%,在抗病品种中,南油868、浙油50表现为免疫,孝核杂737表现为高抗。这些品种可作为抗病品种推广应用。2、对12份田间土样的根肿菌含量进行荧光定量PCR检测,结果表明,在测试的土样中根肿菌的休眠孢子数量一般在10~5-10~6个/g土样。在以十倍梯度稀释土样中,10~3个休眠孢子/g土是油菜根肿病发生的阈值,荧光定量PCR可以定量检测到拷贝数为2.44×10~2个,浓度为4.88×10~3个休眠孢子/g土样。选择一定浓度的根肿菌质粒DNA标准品绘制标准曲线,曲线呈负相关的关系,使用标准曲线可以评估土样中最初含菌的数量,实验证实了可以构建高效、快捷、特异的荧光定量检测根肿菌方法。3、对检测根肿病菌的LAMP的反应时间和温度（65℃50min）进行优化。根据SYBR GreenⅠ染料的颜色变化对LAMP扩增反应结果进行判断,LAMP最低可以检测到183fg的根肿菌DNA,灵敏度比常规PCR高出1000倍。基于LAMP原理建立的油菜根肿病菌的检测技术具有特异性好、灵敏度高的优点,可特异性的检测出根肿病菌。整个检测结果仅需50min,同时不需要复杂仪器,一个恒温水浴锅就可以完成整个反应体系,实现扩增。
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