脊髓灰质炎病毒(Poliovirus，PV，简称脊灰)是引起脊髓灰质炎的病原体，主要是通过侵犯中枢神经系统，引发弛缓性肌肉麻痹。世界卫生组织(WHO)于1988年提出“到2000年全球消灭脊髓灰质炎”的决议后，全球广泛使用脊灰疫苗，脊髓灰质炎病例也减少了99%以上。目前，世界上除极少数国家偶有少量脊灰病例发生外，世界正处于彻底根除脊髓灰质炎的边缘，世界各国正在为实现全球无脊灰做出最后的努力。脊灰病毒抗体检测对于研究脊灰病毒流行病学监视、疫苗免疫效果评估和衍生型病例具有重要的意义，本论文拟用脊灰病毒Sabin株Ⅰ型单克隆抗体研制检测人类血清中脊灰病毒抗体的试纸条，为临床诊断提供重要参考。
　　复苏培养本实验室制备的抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆细胞株62-F5，细胞状态良好。用间接ELISA测定单克隆细胞上清效价为1∶8，与此细胞冻存之前的效价一致，表明此单克隆细胞较稳定。
　　用弗氏不完全佐剂对Balb/c雌鼠致敏，一周后，腹腔接种以上杂交瘤细胞，接种一周后开始密切观察小鼠生命体态。当小鼠腹部膨大，有紧绷感时，活体抽取腹水；若小鼠活力下降，体感温度降低，应及时处死小鼠收集腹水。腹水收集后，用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体，通过超滤浓缩后测得单抗浓度为15.364mg/mL，ReducedSDS-PAGE与Non-reducedSDS-PAGE分析纯化后的单抗，结果表明：单抗纯度较高，重链约70KDa，轻链约23KDa；根据Non-reducedSDS-PAGE电泳图谱可知，此单抗分子量约800~900KDa，此单抗类型可能为IgM。用间接Elisa测定浓缩后的单抗效价为1∶51200。
　　采用柠檬酸三钠还原法制备40nm胶体金颗粒，用此胶体金标记单抗，再与脊灰Ⅰ型抗原结合，形成胶体金-抗体-抗原复合物，将此复合物固定在金标垫上；将NC膜黏附在PVC板中间位置，在T线处包被浓度为1mg/mL的鼠抗人IgG（2μg/cm）；在C线处包被1mg/mL的羊抗鼠IgG（2μg/cm）；将金标垫黏接在NC膜一端，重叠约2mm；样品垫黏接在金标垫上，重叠约2mm；吸水垫黏接在NC膜另一端，重叠约2mm；最后将试纸条组装在塑料外壳中。该胶体金试纸条检测脊髓灰质炎病毒抗体标准阳性血清的敏感性为1∶80；特异性检测显示对脊灰阳性为阳性结果，对甲型肝炎病毒抗体阳性血清、乙型肝炎病毒抗体阳性血清、麻疹病毒抗体阳性血清、脊灰病毒抗体阴性血清进行检测显示为阴性结果，说明该试纸条特异性良好。与PV-IgGELISA检测符合率为86.7%。在4℃和室温条件下保存3个月，其灵敏度和特异性没有明显变化，该胶体金试纸条稳定性良好。
　　本研究初步建立检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金试纸条，该研究为脊灰的流行病学研究以及快速大规模检测脊灰Ⅰ型疫苗免疫效果均具有重要意义。