铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)是一种分布广泛的人类条件致病菌，临床上可引起急性或慢性感染。现有大量研究表明，细菌通过将毒力因子转运到靶细胞而发挥毒性，而分泌系统在这一过程中扮演了重要角色。六型分泌系统(TypeⅥsecretionsystem,T6SS)是铜绿假单胞菌中一种重要的分泌系统，能分泌多种毒力蛋白至环境或真核细胞中，还能促进铜绿假单胞菌生物被膜的形成，在铜绿假单胞菌的致病性及耐药性中发挥重要作用。
　　铜绿假单胞菌基因组具有3种功能不同的T6SS基因群（分别为H1-T6SS、H2-T6SS和H3-T6SS），所编码的蛋白分别组成3种相应的六型分泌系统。本实验室前期利用蛋白质质谱技术对H2-T6SS分泌系统的分泌组进行了鉴定，结果表明AotJ蛋白可通过H2-T6SS分泌到细菌胞外。以此为基础，本论文对AotJ蛋白的分泌机制、蛋白功能及其调控机制进行了全面的研究。我们发现AotJ蛋白通过与六型分泌蛋白VgrG2b直接作用分泌至细菌胞外，且AotJ的信号肽在此过程中对其分泌没有明显的影响。已有报道表明AotJ蛋白参与了精氨酸的转运，我们猜测AotJ可与精氨酸直接结合，利用ITC技术我们发现AotJ与精氨酸有很强的结合能力；而且表型检测表明aotJ缺失突变株在以精氨酸为唯一碳源的环境中生长变慢。这些结果表明AotJ蛋白是一种精氨酸结合蛋白，参与精氨酸转运并影响细菌的生长。进一步地我们对AotJ及H2-T6SS系统的调控机制进行了研究。我们通过实时定量PCR与Westernblot实验分别对AotJ蛋白，六型分泌蛋白HcpA以及六型结构蛋白HsiA2等的表达进行了研究，发现精氨酸可诱导上述蛋白的表达。另外，我们发现转录调节子MvaT和MvaU共同负调节aotJ和H2-T6SS基因的表达，且外源精氨酸抑制MvaT和MvaU的表达，这表明外源精氨酸通过抑制MvaT和MvaU的表达，解除了上述两个蛋白对AotJ及六型分泌系统的抑制。综上所述本论文首次对AotJ的分泌机制、功能和调控进行了全面的研究，研究结果表明胞外精氨酸通过抑制调节基因mvaT和mvaU的表达，促进精氨酸结合蛋白AotJ及H2-T6SS系统的表达，并通过转运胞外精氨酸促进细菌生长。本论文研究结果加深了我们对于铜绿假单胞菌中精氨酸代谢以及六型分泌系统功能多样性的认识，为进一步地开发针对性地治疗策略或药物提供了理论基础。