目的:实验一从分子水平研究电针内关穴对心肌缺血小鼠心肌细胞Gi、Gs蛋白表达的影响,实验二用慢性应激刺激,结合情志因素来加重心肌缺血的损伤,观察电针内关穴对炎症因子及心肌细胞Gi、Gs蛋白表达的影响。探讨内关穴治疗心肌缺血的机理和内关穴治疗慢性应激抑郁合并心肌缺血的机理,为内关穴与心以及经络与脏腑之间关联,及情志因素在心肌缺血的发病与治疗的相关性之中提供理论依据。材料与方法:在研究电针内关穴对心肌缺血小鼠心肌细胞Gi、Gs蛋白表达的影响的实验中,选取24只C57BL/6（SPF级）小鼠和21只同品系酸敏感离子通道3（SPF级）基因敲除小鼠,随机分为5组,为正常组、模型组、内关组、列缺组和非经非穴组,给予多点皮下注射异丙肾的方法建立心肌缺血模型,观察电针内关组与电针列缺组、电针非经非穴组比较心电图ST段值以及T波值的改变;用Western-blot法分析Gi、Gs蛋白表达,光镜观察心肌组织形态学的变化。在研究电针内关穴对慢性应激抑郁合并心肌缺血大鼠炎症因子IL-1、IL-2、IL-8及心肌细胞Gi、Gs蛋白表达的影响实验中,选取50只SD大鼠随机分为5组,为正常组、心肌缺血模型组、心肌缺血合并慢性应激抑郁模型组、内关治疗1组、内关治疗2组,给予多点皮下注射异丙肾上腺素和强制束缚加游泳的方法建立心肌缺血合并慢性应激抑郁模型,经电针内关治疗1组与内关治疗2组后,采用Western-blot法检测心肌细胞Gi、Gs蛋白表达的影响,采用ELISA法检测血浆中IL-1、IL-2、IL-8的含量。结果:1.C57BL/6和ASIC3^-/-两种小鼠造模后,除正常组外,各组小鼠ST段值与T波值都有不同程度抬高,差异有统计学意义（P<0.05）,表明心肌缺血模型成功建立。经过7天电针干预后,内关组、列缺组和非经非穴组ST段均有降低,各组与本组造模后比较差异有统计学意义（P<0.05）,与模型组7天电针干预后比较有差异（P<0.05）。内关组ST段降低更加明显,与列缺组和非经非穴组比较差异有统计学意义（P<0.05）。但未降低到正常水平。提示:电针内关穴,可明显改善小鼠急性心肌缺血损伤后的心电图ST段值与T波值的异常抬高,促进缺血心肌心电图ST段值与T波值的恢复,列缺穴和非经非穴组干预效果差于内关穴组。C57BL/6小鼠内关组与ASIC3^-/-小鼠内关组比较,C57BL/6小鼠组心电图ST段值与T波值降低更显著。2.通过光镜检测心肌缺血心肌组织形态改变,电针内关穴、列缺穴和非经非穴对心肌缺血的两种小鼠心肌细胞均有一定的作用,但是电针内关穴对C57BL/6与ASIC3^-/-小鼠的心肌保护作用更明显。3.C57BL/6和ASIC3^-/-两种小鼠造模后与正常组比较,模型组、内关组、列缺组和非经非穴组C57BL/6小鼠Gs蛋白表达均有所降低,Gi蛋白表达均有所升高,且具有统计学意义（P<0.05）;经电针干预后与模型组比较,内关组、列缺组Gs蛋白表达均有所上升,Gi蛋白表达均有所下降,且具有统计学意义（P<0.05）;内关组与列缺组比较,内关组Gs蛋白表达上升更明显,Gi蛋白表达下降更明显,且具有统计学意义（P<0.05）。提示:电针内关穴可明显增加C57BL/6和ASIC3^-/-两种小鼠Gs蛋白表达,降低两种小鼠Gi蛋白表达,但没能恢复到正常水平,列缺组没内关组效果明显,且具有统计学意义（P<0.05）,非经非穴组效过不明显。C57BL/6小鼠内关组与ASIC3^-/-小鼠内关组比较,C57BL/6小鼠组Gi、Gs蛋白表达更明显。4.与正常组比较,心肌缺血模型组、心肌缺血合并慢性应激抑郁模型组,血清CK-MB、LDH都有所升高,且具有统计学意义（P<0.05）。提示心肌缺血造模成功。与正常组、心肌缺血模型组以及内关治疗1组比较,心肌缺血合并慢性应激抑郁组和内关治疗2组大鼠体重增加减慢,蔗糖摄入量减少,差异具有统计学意义（P<0.05）,提示造模方法可诱发大鼠慢性应激抑郁的发生。与正常组比较,心肌缺血模型组与心肌缺血合并慢性应激抑郁模型组血清的IL-1、IL-2、IL-8含量升高,Gi蛋白表达升高、Gs蛋白表达降低,且具有统计学意义（P<0.05）;与心肌缺血模型组比较,心肌缺血合并慢性应激抑郁模型组的血清IL-1、IL-2、IL-8含量升高更明显、Gi蛋白表达升高更明显、Gs蛋白表达降低更明显,且具有统计学意义（P<0.05）,说明慢性应激抑郁能加重炎症因子含量、加重Gi蛋白表达升高、加重Gs蛋白表达下降。电针内关穴后,与心肌缺血模型组及心肌缺血合并慢性应激抑郁模型组比较,内关治疗1组与内关治疗2组的血清IL-1、IL-2、IL-8含量降低,Gi蛋白表达降低、Gs蛋白表达上升,且具有统计学意义（P<0.05）;与内关治疗2组比较,内关治疗1组IL-1、IL-2、IL-8含量降低更明显,Gi蛋白表达降低更明显、Gs蛋白表达上升更明显,且具有统计学意义（P<0.05）。提示:电针内关穴可明显改善心肌缺血合并慢性应激抑郁大鼠血清中IL-1、IL-2、IL-8含量,改善Gi、Gs蛋白异常表达,但是电针内关穴对单纯心肌缺血大鼠各项指标的改善较心肌缺血合并慢性应激抑郁大鼠的效果更明显。结论:1.电针内关穴通过降低Gi蛋白表达及升高Gs蛋白表达,达到保护心肌细胞,从心电图的改善、组织形态学的改善中体现。2.针刺对C57BL/6小鼠治疗作用明显优于对ASIC3^-/-小鼠,可能的机制是ASIC3参与针刺作用的外周感受器传入神经机制,因此针刺内关穴可以激活ASIC3受体离子通道,从而抑制交感神经,缓解因异丙肾上腺素兴奋交感神经所引起的心肌缺血的症状。3.慢性应激抑郁加重了心肌缺血损伤,说明情志因素可以通过炎症因子改变影响心肌缺血的发生发展。电针内关穴可通过调节炎症因子表达和心肌细胞Gi、Gs蛋白来减轻心肌缺血合并慢性应激抑郁大鼠的心肌损伤,从而同时治疗情志病及心系病,说明内关穴是情志与心系病相互关联的经络基础。