PGRP-S在肝细胞癌中的表达以及对肝癌微环境的重塑

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背景肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是消化系统恶性肿瘤中比较常见的,疾病进展较快且早期不易检测,大部分患者出现症状时已处于晚期,预后并不理想。目前认为影响肝细胞癌的发生和发展是肝癌细胞和其所处的微环境相互作用的结果。肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor-infiltrating lyphocytes,TILs)是肿瘤所处微环境的代表性成分之一。有研究报道,淋巴细胞可以分泌肽聚糖识别蛋白S(Peptidoglycan recognition protein S,PGRP-S,PGLYRP1,Tag7),其是模式识别家族成员之一,PGRP-S-Mts1(钙结合蛋白S100A4)复合物可以引起淋巴细胞的迁移。肝癌肿瘤微环境中PGRP-S的表达情况以及作用机制尚未见报道,因此本课题拟进一步探讨PGRP-S在肝癌微环境中的表达定位以及作用。目的检测PGRP-S在肝癌细胞中的表达以及对肝癌细胞增殖、迁移能力的影响,明确该基因在肝癌进展中的作用;检测PGRP-S在肿瘤微环境中对肝癌细胞及TILs的影响,以期为肝癌的免疫治疗提供新思路。方法1.通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)检测肝癌细胞(LM3、Hep G2、SMMC7721、97H、97L、Huh7)及正常肝细胞(LO2)中PGRP-S m RNA的表达情况;通过免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)实验检测PGRP-S在45例肝癌石蜡组织样本中的表达情况,最后应用统计学方法查看肝癌组织中PGRP-S的表达不同与患者年龄、淋巴结转移等临床病理参数之间的关系。2.通过瞬时转染方法构建肝癌细胞PGRP-S沉默表达的细胞株,再通过蛋白质印迹(Western blotting,WB)实验方法检验肝癌细胞中PGRP-S的沉默效率。3.通过细胞功能实验检测PGRP-S基因表达水平的不同对肝癌细胞增殖和Hep G2细胞迁移能力的影响:划痕愈合、Transwell、平板克隆、CCK-8实验。4.通过免疫荧光实验(Immunofluorescence technique,IF)检测PGRP-S因子和T淋巴细胞对肝癌细胞表达PGRP-S的影响。采用Transwell实验观察PGRP-S因子和T淋巴细胞对肝癌细胞的迁移能力的影响。5.通过免疫荧光实验检测PGRP-S因子和肝癌细胞对T淋巴细胞表达PGRP-S的影响。采用Transwell检测PGRP-S细胞因子和肝癌细胞对T淋巴细胞的迁移能力的影响。结果1.PGRP-S在肝细胞癌组织中的表达显著高于癌旁组织,并与分化程度及淋巴结转移呈正相关关系;2.沉默PGRP-S可显著降低肝癌细胞增殖和迁移能力;3.T淋巴细胞分泌的PGRP-S可诱导肝癌细胞迁移及PGRP-S入核表达,肝癌细胞分泌的PGRP-S增强T淋巴细胞的迁移能力及表达。结论PGRP-S促进肝癌细胞的增殖和迁移且对肝癌微环境的重塑起到调控作用。
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