高产几丁质酶菌株的分离鉴定与酶学性质研究

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几丁质又称甲壳素,是广泛存在于自然界的一种含氮多糖类生物性高分子,其蕴藏量在地球上的天然高分子中占第二位,具有可再生性、生物相容性、生物可降解性、生物功能性等特点。几丁质酶是几丁质专一性降解酶,催化几丁质水解生成壳寡糖、壳聚糖和N-乙酰葡糖胺等物质。其中壳寡糖具有许多种功效,在国外有软黄金之称,可应用于医药、保健、食品、日化、农业等领域。本研究从天津市汉沽对虾养殖场底泥中筛选到一株产几丁质酶的菌株WY-1,并进行了鉴定及产酶条件优化,同时对该菌株产生的几丁质酶进行了分离纯化,初步研究了其酶学性质。主要方法与结果如下:1、采用平板透明圈法进行几丁质酶产生菌的分离纯化,筛选到20株可在以几丁质为唯一碳源的胶体几丁质固体平板上生长的菌株,通过测定酶活力,对这些菌株进行复筛,获得一株产酶活力和透明圈直径与菌株直径的比值相对较高的菌株WY-1。2、通过菌株WY-1的菌落特征、亚形态观察、生理生化特征和16SrDNA序列同源性分析,最终确定该菌株为蜂房芽孢杆菌(Paenibacillus alvei)。3、通过单因素和响应面法结合的方法,对WY-1的产酶条件进行优化,最终确定其最佳产酶条件为:培养基中胶体几丁质含量为1.62 %,培养温度为40℃,培养时间为72h,在此条件下,菌株WY产生的几丁质酶活力为13.07U/mL。4、采用盐析、凝胶过滤层析、透析、超滤、冷冻干燥等方法分离纯化几丁质酶,SDS-PAGE分析表明,该几丁质酶为单体酶。同时研究确定了该几丁质酶的最佳酶活条件:温度为50 ℃、pH为7.0、胶体几丁质含量为1.5 %。这些研究结果既丰富了蜂房芽孢杆菌的生物学资料,又为该菌株的进一步开发利用奠定了基础。
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