牛樟芝是中国台湾特有的一种稀有药用真菌,只寄生在倒伏枯死牛樟树的心材内壁,难以获得。牛樟芝具有很强的药用作用,其菌丝体中特有的泛醌类化合物4-acetylantroquinonol B(以下简称4AAQB)对肝癌细胞Heph2具有明显的抑制作用,可作为一种潜在的抗癌药物。但由于其生长条件的限制,无法大规模生产。本实验以液态发酵培养的方式获得菌丝体,以改进子实体培养所带来的生产周期长和质量不稳定等缺点。在液态发酵中使用发酵耦合提取新工艺,使原本胞内产物流向胞外,被发酵液中提取剂富集,实现初步分离。主要工作内容如下:一、通过对各类含苯环类物质等外源添加物的种类,添加时间,添加量进行探究,成功筛选出第发酵过程第6 d添加0.008%(m/v)的对甲基苯甲酸,其做为小分子物质添加低浓度即可大幅提升牛樟芝菌丝体中的4AAQB和三萜类化合物,产量分别为0.57 mg/g和130.26 mg/g,较空白对照组提升了 3.35倍和1.61倍。在目前的研究中尚数首次,可以避免以往的外源添加物量大,成分复杂造成后续分离困难等因素,对牛樟芝合成4AAQB和三萜类化合物的代谢途径研究具有指导意义。二、实验中对发酵耦合提取4AAQB体系中表面活性剂和提取剂的种类、添加量、添加时间进行了初步探究。实验所得的最优条件为在发酵过程的第0天添加2%(v/v)的Tween-80,第16 d添加30%(v/v)的油酸。胞内4AAQB产量为0.011mg/g,有机相中产量可达1.6 mg/g,总产量是空白组的26.67倍,极大地提升了单位体系中4AAQB的产量。三、实验中对发酵耦合提取三萜类化合物体系中表面活性剂和提取剂的种类、添加量、添加时间进行了初步探究。根据研究结果其最优条件为在在发酵过程的第0d添加2%(v/v)的Tween-80,在第16 d添加30%-50%(v/v)的油酸。其胞内三萜类化合物产量为64.2 mg/g,有机相中产量为12 g/L,极大了提升了单位体系中三萜类化合物的产量,其最优条件与发酵耦合提取产4AAQB较为接近,可以考虑使用统一条件同时生产这两种目的产物。四、结合上述最优条件,同时使用对甲基苯甲酸和发酵耦合提取体系进行探究,即发酵第0 d添加2%的Tween-80,第6 d添加0.008%的对甲基苯甲酸,在发酵第16 d添加30%的油酸,在胞内可以得到0.09 mg/g的4AAQB和210 mg/g的三萜类化合物,在有机相中可以得到6.84 mg/g的4AAQB和6.94 g/L的三萜类化合物,相较于单一使用这两种方法,在目的产物4AAQB方面有了较为明显的提高。