背景:异常的心脏脂质代谢引发心脏脂毒性,临床最终表现为代谢紊乱为特征的非缺血性心力衰竭。血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)是血管生成素样蛋白之一,介导了对脂蛋白脂肪酶(LPL)活性的抑制作用。ANGPTL4表达或功能受损,造成心肌细胞内过度脂肪酸供应,从而引起心脏脂毒性病变。传统中医理论认为心脏脂毒性属于“痰”或“浊毒”的范畴,以化痰解毒为治疗原则。厚朴酚(Magnolol)提取自中药厚朴,是一种天然的双酚类化合物,具有保护心脏免受缺血/再灌注损伤、减少动脉粥样硬化变化、保护内皮细胞免于凋亡、抑制中性粒细胞-内皮粘附等多种心血管保护作用。其对心肌ANGPTL4的调节以及机制尚不清楚。本课题组前期在平滑肌细胞的基因芯片结果显示ANGPTL4可能是生殖细胞核因子(GCNF)的靶基因,而GCNF具有较为重要的血管生物学功能。本课题拟探究厚朴酚是否通过GCNF调节ANGPTL4基因进而调节心脏脂质代谢。目的:(1)厚朴酚是否调节心肌细胞系H9C2细胞中ANGPTL4的表达;(2)H9C2细胞中ANGPTL4是否是GCNF的靶基因;(3)中药厚朴酚是否通过GCNF调节ANGPTL4,这一作用是否依赖PPARδ。方法:采用MTT方法检测厚朴酚对H9C2细胞的毒性作用;采用RT-PCR技术,检测大鼠心脏、大鼠原代心肌细胞、H9C2细胞中ANGPTL4家族的表达;采用细胞免疫荧光染色技术,观察H9C2细胞中GCNF的亚细胞定位;分别采用RTqPCR、Western Blot技术,检测厚朴酚对H9C2细胞中GCNF mRNA和蛋白表达的影响;运用siRNA介导的沉默技术敲低H9C2细胞中GCNF,用RT-qPCR技术和Western Blot技术检测ANGPTL4的表达;分别采用siRNA介导的沉默技术敲低H9C2细胞中GCNF和腺病毒介导的GCNF过表达,观察GCNF是否参与厚朴酚对ANGPTL4的调节;采用萤光素酶报告基因检测技术,分析厚朴酚对ANGPTL4和GCNF基因启动子活性的影响;并检测GCNF敲低或者过表达对ANGPTL4基因启动子活性的影响;采用RT-qPCR技术检测饥饿大鼠和自发糖尿病小鼠心脏组织中GCNF的表达;采用细胞刮擦-愈合模型,检测过表达GCNF的H9C2细胞培养上清对内皮细胞(HUVEC)迁移的影响。结果:(1)大鼠心脏组织、原代心肌细胞和H9C2细胞系均表达ANGPTL 4;(2)厚朴酚上调H9C2细胞中ANGPTL4(P<0.05)和GCNF(P<0.05)的mRNA表达;(3)GCNF基因沉默可以降低H9C2细胞中ANGPTL4的mRNA表达水平(P<0.01),并且抑制ANGPTL4启动子活性(P<0.01);(4)GCNF通过调控ANGPTL4启动子-500到-250 bp DNA来发挥对ANGPTL4的转录调节作用;(5)GCNF和PPARδ基因沉默均可以部分逆转厚朴酚诱导的ANGPTL4表达(P<0.05);(6)饥饿大鼠心肌组织中GCNF和ANGPTL4表达增加(P<0.01)。结论:以上结果表明厚朴酚可正向调节相互独立的GCNF-ANGPTL4信号轴和PPARδ-ANGPTL4信号轴来上调心肌细胞中ANGPTL4的表达,而且是一种有效激动PPARδ的天然激动剂。厚朴酚通过激活PPARδ快速调节ANGPTL4表达,而通过上调GCNF维持ANGPTL4表达,有望作为一种治疗心脏脂毒性的潜在药物。