【摘 要】
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目的本研究旨在探讨自噬、线粒体与内质网应激在NECA保护心肌缺血再灌注损伤中的作用,为临床心肌梗死的防治与护理提供依据。方法将56只SPF级成年雄性Wistar大鼠随机分为假手
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目的本研究旨在探讨自噬、线粒体与内质网应激在NECA保护心肌缺血再灌注损伤中的作用,为临床心肌梗死的防治与护理提供依据。方法将56只SPF级成年雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、腺苷受体激动剂组(NECA组)和内质网应激抑制剂组(TUDCA组)4组,每组14只。使用Langendorff装置制作大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型。透射电镜观察心肌超微结构的改变;Western blot检测内质网应激标志蛋白IRE1α、XBP1s和自噬标志蛋白Beclin1、LC3的表达水平;免疫组化观察IRE1α、LC3的表达情况;线粒体肿胀实验评估m PTP开放程度。结果1透射电镜观察发现,Sham组肌丝排列致密规则,肌节结构清晰,线粒体结构清楚,形态完整,嵴排列整齐,基质致密,且并未观察到自噬小体;而I/R组大部分肌丝断裂、缺失,肌节挛缩,可见坏死、溶解,线粒体肿胀,结构模糊,嵴排列稀疏甚至断裂,肌浆网扩张,线粒体空泡变性,且观察到大量自噬体的形成;NECA组及TUDCA组的线粒体损伤较I/R组减轻,肌丝排列较规则,肌节轻度挛缩,部分线粒体轻度水肿,无自噬体形成。2 Western blot结果发现,I/R组的IRE1α、XBP1s、Beclin1和LC3蛋白表达水平与Sham组相比明显升高(P﹤0.05),而给予NECA和TUDCA后能明显抑制上述蛋白的表达水平(P﹤0.05)。3免疫组化结果显示,Sham组基本没有观察到IRE1α和LC3的棕黄色阳性染色区域,而心肌I/R后棕黄色阳性染色区域大大增加,给予NECA和TUDCA处理后,虽然也能观察到小部分阳性染色区域,但相比I/R组大大减少。4线粒体肿胀实验结果表明,I/R组线粒体吸光度显著下降,与Sham组比差异具有统计学意义(P﹤0.05);而NECA组和TUDCA组的线粒体吸光度虽也有不同程度的下降,但下降程度明显小于I/R组(P﹤0.05)。结论NECA可通过抑制内质网应激、降低自噬和减轻线粒体损伤发挥心肌保护作用。
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