【摘 要】
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甘露二糖是由两个D-甘露糖分子通过β-1,4糖苷键连接组成的一种功能性寡糖,具有增强机体免疫,提高肠道吸收功能,抗沙门氏菌感染以及抗过敏等益生功能,在食品药品等领域具有广阔的应用前景。本研究采用三种β-甘露聚糖酶Man A、Aa Man A和Ba Man113A分别与α-半乳糖苷酶Gal27A进行复配,研究它们在半乳甘露聚糖底物槐豆胶水解过程和水解产物中的区别以制备甘露二糖。研究发现α-半乳糖苷酶
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甘露二糖是由两个D-甘露糖分子通过β-1,4糖苷键连接组成的一种功能性寡糖,具有增强机体免疫,提高肠道吸收功能,抗沙门氏菌感染以及抗过敏等益生功能,在食品药品等领域具有广阔的应用前景。本研究采用三种β-甘露聚糖酶Man A、Aa Man A和Ba Man113A分别与α-半乳糖苷酶Gal27A进行复配,研究它们在半乳甘露聚糖底物槐豆胶水解过程和水解产物中的区别以制备甘露二糖。研究发现α-半乳糖苷酶Gal27A与β-甘露聚糖酶Man A复配水解槐豆胶时,最终水解产物以半乳糖、甘露糖、甘露二糖和甘露三糖为主,由于β-甘露聚糖酶Man A对甘露三糖活性较低,难以将甘露三糖完全降解为甘露二糖;而Ba Man113A作为一种外切型β-甘露聚糖酶,对甘露三糖活性较高。因此,采用α-半乳糖苷酶Gal27A与β-甘露聚糖酶Man A、Ba Man113A顺序添加的方式协同水解槐豆胶制备甘露二糖,最终制备的甘露寡糖均为甘露二糖,单糖为半乳糖和甘露糖。三种酶协同水解槐豆胶制备的甘露二糖中还混有半乳糖和甘露糖,这两种单糖都属于可发酵性的单糖。研究选用了实验室保藏的一株酿酒酵母,采用微生物发酵法对酶水解制备的甘露二糖进行纯化,除去了混合在甘露二糖中的甘露糖和半乳糖,得到了单一聚合度的甘露二糖;纯化后甘露二糖的浓度为1.63 g/L,含量为96.64%,底物转化率为41.79%。随后对制备甘露二糖的工艺进行优化,提高底物浓度、添加酶的冻干粉进行催化,最终甘露二糖的浓度为25.99 g/L,含量为98.37%,底物转化率为51.98%。本研究是从酶的协同作用出发对甘露二糖的制备进行了研究,为制备高纯度甘露二糖提供了新的思路和方法,同时甘露二糖的大量制备也将促进对其生理功能的研究以及在食品药品的等领域的应用。
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