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食品安全问题是一个全球性的公共卫生安全问题,一直都是社会关注的焦点,因为这关系着每个人的切身利益,而其中,由食源性致病菌引起的食品安全问题更是日前人们最为关注的点。因为食源性致病菌具有很大危害性且很大地影响食品污染,因此,建立快速、便捷、灵敏的食源性致病菌检测方法对预防食品安全问题以及保护人类健康问题具有很重要意义。阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii）是一种食源性条件致病菌,会引起一系列病症,其中包括败血症、坏死性结肠炎以及新生儿脑膜炎。该菌可存在于牛奶、蔬菜、肉类和茶等各种食物内,但婴幼儿配方奶粉（powdered infant formula,PIF）是其最主要的污染源。由于阪崎肠杆菌对新生儿具有巨大的潜在风险,已被FAO-WHO正式确认为A类病原体。本论文基于阪崎克罗诺杆菌的特异序列及特异性结构构建了四种阪崎克罗诺杆菌活菌的快速检测方法,简述如下:1)建立了基于逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcriptase–Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）核酶的阪崎克罗诺杆菌活菌的电化学检测方法。在该研究中,首先对阪崎克罗诺杆菌的α-1,6-葡萄糖苷酶基因进行特异性引物的设计,并通过对引物的修饰,利用RT-PCR扩增出大量含有G-四链体的DNA产物。在氯化血红素（hemin）在下,形成具有过氧化物酶活性的G-四链体/hemin核酶,催化底物3’,3’,5’,5’-四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine,TMB）氧化生成具有电化学活性的氧化物。通过丝网印刷碳电极（screen-printed carbon electrode,SPCE）的对酶催化的电化学信号用计时电流法获得,对催化产物进行表征,并通过电流信号值与样品中靶标基因的含量的关系,从而实现对样品中的阪崎克罗诺杆菌活菌数进行定量分析。通过对该检测方法特异性和灵敏度进行评价,结果显示,该方法特异性强,检出限为5.01×102 CFU/m L。电化学生物传感器检查的方法电流信号稳定,操作简单方便,只需微量的检测体系,利于推广应用。2)建立了基于LAMP-PMA的阪崎克罗诺杆菌活菌的可视化快速检测方法。叠氮溴化丙锭（propidium monoazide,PMA）作为一种对DNA具有着高度亲和力的染料,它可以进入细胞壁或细胞膜不完整的死菌细胞中,然后与死菌细胞中DNA发生交联。环介导等温扩增（Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP）扩增技术与PMA结合,能够有效地抑制死菌细胞中DNA的扩增,从而实现对活菌的检测。根据阪崎克罗诺杆菌omp A的特异序列,设计LAMP引物,以PMA处理过的细菌的DNA为检测靶标,羟基萘酚蓝（Hydroxynaphthol Blue,HNB）作为一种金属离子指示剂将分子扩增情况转化为光学信号,通过肉眼观测实现对阪崎克罗诺杆菌活菌的可视化快速检测。在可行性实验验证后,对实验条件进行优化,并在优化条件下对该检测方法的特异性和灵敏度进行评价。结果表明基于LAMP-PMA的阪崎克罗诺杆菌活菌可视化检测方法,具有实验设备简单,操作简便、特异性良好等优点且灵敏度达1.2×102CFU/m L。3)建立了基于RT-PSR的阪崎克罗诺杆菌活菌的可视化快速检测方法。聚合酶螺旋反应（Polymerase Spiral Reaction,PSR）作为一种新型的恒温扩增方法,无需借助升温及解旋酶即可实现DNA解链变性,在等温条件下即可完成核酸扩增。基于PSR的等温扩增特点,以阪崎克罗诺杆菌RNA为检测靶标,设计RT-PSR引物,并在扩增反应体系中加入HNB,作为体系中Mg2+浓度的指示剂,通过体系颜色的变化,从而实现对阪崎克罗诺杆菌活菌的可视化快速检测。首先对实验条件进行优化,随后,在最优的实验条件下对该可视化检测方法的特异性和灵敏度进行评价。实验结果显示,该检测策略具有时间短、低成本、特异性强等优点,且灵敏度达1.2×102 CFU/m L。4)建立基于核酸适配体-核酶的阪崎克罗诺杆菌活菌的可视化快速检测。针对阪崎克罗诺杆菌活菌合成其核酸适配体,并根据该核酸适配体设计并合成含与适配体部分互补序列及两个分裂G-四链体序列的探针。该检测方法直接以阪崎克罗诺杆菌活菌为检测靶标,靶标不存在条件下两个探针与适配体互补配对,而两个探针G-四链体序列部分结合构建成G-四链体结构,在hemin存在,形成具有过氧化物酶活性的G-四链体/hemin核酶。在过氧化氢（H2O2）存在下,该酶对底物2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（Agreement of Basic Telecommunications Services,ABTS）进行催化,产生光学信号,最终直接通过肉眼分辨出样品中是否存在阪崎克罗诺杆菌活菌,且该检测方法的灵敏度可达1.2CFU/m L。通过进一步对该检测方法的特异性的评价,结果显示该检测方法特异性较强。本研究表明,基于核酸适配体-核酶可视化检测阪崎克罗诺杆菌活菌的策略是一种稳定、无酶、无标记、低成本、高特异性、灵敏度高的检测方法。