【摘 要】
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目的研究腺病毒介导的PML基因对胆囊癌细胞株GBC-SD的生长抑制作用及其作用机理,探讨腺病毒载体介导的PML基因用于进展期胆囊癌基因治疗的可能性.方法1.用不同滴度绿色荧光蛋
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目的研究腺病毒介导的PML基因对胆囊癌细胞株GBC-SD的生长抑制作用及其作用机理,探讨腺病毒载体介导的PML基因用于进展期胆囊癌基因治疗的可能性.方法1.用不同滴度绿色荧光蛋白重组腺病毒(Ad-GFP)感染胆囊癌细胞株24小时,在显微镜下计数绿色荧光蛋白阳性细胞数的比例以确定腺病毒对胆囊癌细胞株的感染能力.2.用原位杂交法检测PML重组腺病毒的转导效率;原位杂交和免疫组织化学法检测PML mRNA和蛋白的表达量及表达时间.3.胆囊癌细胞株GBC-SD培养在24孔培养板中,分别感染Ad-PML和Ad-对照,用结晶紫分析法和MTT法检测细胞的生长状况.4.用感染Ad-PML、Ad-对照和未经任何处理的胆囊癌细胞悬液裸鼠皮下注射,一月后观察细胞致瘤能力改变,并测量肿瘤的体积和湿重.5.用DNA片段分析(DNA laddering)和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测Ad-PML感染后GBC-SD细胞凋亡;流式细胞仪检测Ad-PML感染后胆囊癌细胞的细胞周期改变.结论腺病毒介导的PML基因能在胆囊癌细胞GBC-SD细胞中稳定、高效表达:PML能显著抑制GBC-SD细胞的体外生长及其在裸鼠体内的致瘤能力;PML通过诱导胆囊癌细胞凋亡发挥其生长抑制作用,但对细胞周期无明显影响,PML有可能用于胆囊癌的基因治疗.
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