微生物多糖结冷胶的降解及其寡糖的制备

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目前,具有抗氧化、抗病毒、抑菌、抗肿瘤、植物诱抗等活性的功能性寡糖被广泛研究和应用,其最主要的来源之一是各种多糖。作为目前商业化应用十分广泛的一种微生物胞外多糖,结冷胶的降解产物—结冷胶寡糖是否具有某种生物学活性或特殊的理化性质,进而具备新的功用还未见于相关报道,且关于结冷胶的降解规律也鲜有人研究。本文旨在探索一种降解结冷胶的方法,制备结冷胶寡糖,并探索寡糖结构和功能活性。通过60Co-γ射线对结冷胶进行辐照处理,研究其对结冷胶分子量及其各种理化性质的影响。结果表明:随着辐照剂量的增加,结冷胶分子量降低,并呈现指数分布的规律,减小趋势逐渐变缓。同时,结冷胶粒径、溶液pH、凝胶强度均呈现降低趋势。当辐照剂量达到175kGy时,经辐照后的结冷胶无法再形成凝胶,与对照组相比较分子量从440kDa降低到70kDa。结合红外光谱和X射线衍射分析,60Co-γ射线很可能是通过作用于固态结冷胶分子链中糖苷键,使糖苷键断裂,从而导致结冷胶分子量降低,凝胶能力下降。考察了辐照处理前后结冷胶产物的抗氧化活性,包括其清除DPPH、O2-、 OH的能力。结果表明:结冷胶本身并不具有抗氧化活性,但经过辐照的产物产生了抗氧化活性。随着辐照剂量的增大,辐照产物对不同自由基清除能力表现并不完全一致。前期研究结果表明随着辐照剂量的增加,结冷胶分子量降低趋于缓慢,在辐照剂量达到175kGy时,辐照产物还是有450个左右单糖组成的多糖。因此,为了得到更小分子量的结冷胶片段和结冷胶寡糖,选择盐酸联合辐照来进一步降解结冷胶,研究了两步法降解结冷胶的作用规律,并建立了一种快速相对定量的分析方法。结果表明:辐照剂量和盐酸水解时间对结冷胶降解作用均显著,摸索出获得两种寡糖ogg4和ogg7的最适降解条件。通过两种分子筛层析柱对两步法联合降解的产物分别进行了脱盐和寡糖分离后,联合薄层层析和质谱进行了分析。结果表明:结冷胶分子链更容易断裂成线性四糖单元倍数长度的片段,相较结冷胶分子链中其他残基的(1→4)键,Rha-(1→3)-Glc键更容易断裂。确定了ogg4和ogg7的寡糖结构,它们分别是线性四糖和线性四糖的二聚体,组成序列分别为Glc-GlcA-Glc-Rha、Glc-GlcA-Glc-Rha-Glc-GlcA-Glc-Rha,且它们具有清除DPPH的能力。
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