【摘 要】
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目的:探讨血管内皮细胞Cx40、Cx43表达的差异对单核-内皮细胞黏附的影响及其机制。方法:通过Transwell小室建立VEC-VSMC共培养模型,采用肿瘤坏死因子TNF-α(10ng/ml)刺激,检
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目的:探讨血管内皮细胞Cx40、Cx43表达的差异对单核-内皮细胞黏附的影响及其机制。方法:通过Transwell小室建立VEC-VSMC共培养模型,采用肿瘤坏死因子TNF-α(10ng/ml)刺激,检测Cx40、Cx43蛋白表达水平;分别构建含有Cx40、Cx43基因的si RNA和慢病毒表达载体,转染VEC细胞,通过Western blot检测在干扰或高表达Cx40的VEC细胞中Cx43的表达情况。同理观察在干扰或高表达Cx43的VEC细胞中Cx40的表达情况;将稳定转染Cx40、Cx43的VEC细胞按照不同比例(5:1、3:1、1:1、1:3、1:5)混合培养,Western blot检测CD73、VCAM-1的表达以及单核-内皮细胞黏附率;再在上述各组中加入CD73抑制剂(AOPCP,50μmol/L)预处理,Western blot检测VCAM-1蛋白表达以及单核-内皮细胞黏附率。结果:TNF-α作用于共培养的VEC-VSMC模型实验结果显示:VEC细胞中Cx40蛋白表达降低,Cx43蛋白表达明显升高;VEC细胞转染Cx40-si RNA、Cx43-si RNA实验结果显示:Cx40干扰后Cx43蛋白表达没有明显变化,Cx43干扰后Cx40蛋白表达明显升高;VEC细胞转染含Cx40、Cx43基因慢病毒表达载体实验结果显示:Cx40上调后Cx43蛋白表达没有明显变化,Cx43上调后Cx40蛋白表达明显降低;稳定转染Cx40、Cx43的VEC细胞按照不同比例(5:1、3:1、1:1、1:3、1:5)混合培养实验结果显示:随着VEC细胞表达Cx43比例升高、Cx40比例降低,CD73蛋白表达逐渐降低,VCAM-1蛋白表达逐渐升高,且单核-内皮细胞黏附率逐渐升高;加入CD73抑制剂(AOPCP)预处理后,VCAM-1表达较未加抑制剂组明显升高,且单核-内皮细胞黏附率也明显升高。结论:肿瘤坏死因子TNF-α上调VEC细胞中Cx43蛋白表达,下调Cx40蛋白表达。Cx43蛋白能影响Cx40蛋白的表达。Cx43高表达能促进VCAM-1蛋白表达增高和单核-内皮细胞黏附力增强,该作用是通过下调CD73蛋白表达实现的。
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