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目的：构建人DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase1，DNMT1）的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）慢病毒载体质粒，进行慢病毒包装并稳定转染食管癌细胞KYSE150。方法：将设计的基因片段合成所需的目的基因，并将目的基因插入慢病毒载体质粒plenti-U6上。plenti-U6-DNMT1重组质粒在293T细胞中进行慢病毒包装，用提取出来的病毒液感染KYSE150细胞。用杀稻瘟菌素对感染后的细胞进行筛选，并对筛选出的稳转细胞用RT-PCR、West blotting法进行鉴定。结果：plenti-U6-DNMT1成功转染的KYSE150细胞株，其DNMT1的mRNA和蛋白表达较转染前均有所下降。结论：成功重组了人DNMT1基因的慢病毒载体质粒，并用该质粒感染及筛选出稳定表达的KYSE150细胞株，为进一步研究DNMT1基因沉默后KYSE150细胞的形态、功能改变奠定了基础。