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目的: 1.研究高脂饮食-链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的2型糖尿病(type2diabetic,T2D)大鼠血管功能障碍产生的可能机制。 2.研究血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)及一氧化碳(Carbonmonoxide,CO)改善T2D大鼠血管功能的可能机制。 方法: SPF级健康5周龄雄性SD大鼠,喂以高糖高脂饲料,诱发胰岛素抵抗后,再以低剂量链脲佐菌素(30毫克/千克)诱导建立T2D大鼠模型。SD大鼠104只随机分成13组(n=8):正常对照组(control),糖尿病模型组(diabetesmellitus),高铁血红素低、中、高剂量组(hemin),CORM-2(一氧化碳释放分子-2)组,T2D+ CORM-2组,T2D+ DMSO组,DMSO组,NS398(COX-2拮抗剂)组,T2D+NS398组,T2D+NAC(超氧化物清除剂)组,T2D+胆红素组(T2D+ bilirubin)。对照组与糖尿病组给予每日腹腔注射生理盐水,连续4周;T2D大鼠分别用高铁血红素(1,5,或25毫克/千克)或CORM-2(5毫克/千克)腹腔注射干预共4周。采用血管环离体灌流装置,观察SD大鼠胸主动脉环舒张反应;Westernblotting法测定大鼠胸主动脉环环氧合酶-2(COX-2)的蛋白表达情况;测定血中碳氧血红蛋白(COHb)、主动脉丙二醛(MDA)含量及一氧化氮(NO)表达水平;测定血红素氧合酶(HO)、超氧化物歧化酶(SOD)在大鼠胸主动脉环的活性表达;测定血浆中血栓素B2的浓度(TXB2∶TXA2的稳定代谢物)。 评价高铁血红素对ACh诱导主动脉血管环(高糖培养)舒张的急性影响。每组中的主动脉环孵育在下列介质中2小时:(1)对照(control)组:含11mmol/L葡萄糖的K-H液;(2)高糖(HG)组:含44 mmol/L葡萄糖的K-H液;(3)高铁血红素+ HG(Hemin+HG)组:含10μ m ol/L高铁血红素和44 mmol/L葡萄糖的K-H溶液(4)高铁血红素(Hemin)组:含10μmol/L高铁血红素和11mmol/L葡萄糖的K-H液;(5)甘露醇组(mannitol)组:含33mmol/L甘露醇和11mmol/L葡萄糖的K-H溶液 结果: 1.空腹血糖、血胰岛素水平及IR指数,血管MDA、血浆TXB2含量等指标在T2D大鼠的表达均高于正常对照组(P<0.01);血管HO、SOD活性及NO在内皮细胞表达在T2D大鼠均低于正常对照组(P<0.01);与正常对照组相比,糖尿病大鼠胸主动脉环ACh舒张曲线下移(P<0.01),血管舒张功能受损。 2.自由基清除剂NAC(一种超氧化物的清除剂)和胆红素(bilirubin)能显著抑制T2D大鼠空腹血糖、血胰岛素水平、IR指数和MDA的上调(P<0.01),改善血管内皮细胞NO表达下调及主动脉舒张能力的下降(P<0.01)。 3.HO-1诱导剂高铁血红素对T2D大鼠空腹血糖、血胰岛素水平、IR指数和TXB2的上调有明显改善作用(P<0.01),伴随着HO活性的增强,降血糖作用明显增加。与T2D组相比,高铁血红素组大鼠胸主动脉环ACh舒张曲线显著上移(P<0.01),血管舒张功能明显改善。Western blotting法测定发现COX-2蛋白表达在T2D大鼠主动脉明显高于正常对照组(P<0.01);高铁血红素中、高剂量组较T2D组可明显抑制COX2在T2D大鼠的过度表达(P<0.05); T2D+COX-2抑制剂NS398组较T2D组胸主动脉环ACh舒张曲线显著上移(P<0.01);高铁血红素干预组较T2D组也明显抑制T2D大鼠主动脉SOD活性的下降、MDA含量的增加(P<0.01)。 4.TXA2拮抗剂SQ29548和血栓素合成酶抑制剂furegrelate对T2D大鼠血管舒张功能有显著改善作用。 5.CORM-2是可释放HO-1产物CO的化学制剂,可以模拟高铁血红素的作用效果。 结论: 1.ROS-COX-2-TXA2途径是引起T2D大鼠血管功能损伤的重要机制。 T2D大鼠胸主动脉SOD活性表达降低,COX-2蛋白表达上调,TXB2在血浆中明显增加,最终引起主动脉舒张能力下降。 2.HO-1-CO信号转导路径可通过抑制ROS-COX-2-TXA2途径改善T2D大鼠受损血管功能。 自由基清除剂NAC和bilirubin、COX-2抑制剂NS398、TXA2拮抗剂SQ29548和furegrelate均可显著改善T2D大鼠血管舒张功能;高铁血红素显著增强T2D大鼠HO和SOD活性,抑制COX-2及TXB2的上调;血红素的降解物CO与HO-1有相类似的作用。在关于2型糖尿病的研究中,本研究首先发现HO-1-CO信号通路对ROS-COX-2-TXA2信号通路的抑制作用。 3.HO-1和CO明显改善T2D大鼠受损血管功能,为临床治疗糖尿病血管并发症提供了新的作用途径。 高铁血红素诱导HO-1表达上调以及CORM-2上调COHb均能明显改善T2D大鼠受损血管的舒张功能。