胰岛再生源蛋白Reg3g（regenerating islet-derived protein,Reg）是小的分泌性c型凝集素,是一个调节免疫及炎症的因子,与很多疾病相关联,包括胰外疾病、胰腺导管腺癌、钙化性胰腺炎、以及糖尿病等,是一种多功能的蛋白质,发挥的主要作用是促进细胞的生长、增殖,抑制伤口的恶化和细胞的凋亡;并且已知Reg在胃肠道,胰腺以及肝脏等系统中可以促进各系统内受损组织的修复。本实验室在前期的各项工作中发现Reg3g在肝病的发生中有可能参与了肝组织的损伤及修复,并且本实验室已通过实验证明了Reg3g能够显著促进大鼠BRL-3A细胞的生长和增殖,但是目前对其对肝细胞作用的信号通路及机制尚缺乏了解。因此,本课题拟探究Reg3g对大鼠BRL-3A细胞作用的通路机制。本文首先采用慢病毒侵染法将Reg3g转染入BRL-3A细胞中,成功得到Reg3g过表达的BRL-3A稳定细胞株,并分别用q RT-PCR、Western Blot、免疫荧光来验证Reg3g过表达的细胞株。为研究Reg3g对BRL-3A细胞增殖调控的作用机理,首先经转录组测序,检测Reg3g过表达（3A-Reg3g）与对照（3A-GFP）组基因的表达谱,筛选出差异表达的基因有1325个,其中872个基因表达上调,453个基因表达下调,并采用GO（Gene Ontology）、KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）和IPA（Ingenuity Pathway Analysis）等生物信息学软件对这些差异基因进行功能聚类、信号通路、疾病与功能等分析。结果发现,上述差异表达基因主要位于胞外区域,介导钙离子和胞外基质等的结合,可能通过PI3K、PKA、PKC等信号通路,参与调控细胞增殖、运动和黏附等生理活动,并与炎症和癌症等病理过程密切相关。为了验证Reg3g能否通过PI3K、PKA和PKC等通路促进肝细胞的增殖,我们通过添加信号通路抑制剂（PI3K抑制剂:LY294002;PKA抑制剂:H89;PKC抑制剂:GO6983）的方法来检测Reg3g作用的信号通路。首先用MTT法检测每种抑制剂的IC50,然后通过Western Blot检测添加各种抑制剂对各信号通路及下游蛋白的表达,再通过MTT和CCK8检测抑制剂添加对Reg3g过表达组（3A-Reg3g）和对照组（3A-GFP）细胞活性的影响,流式分析添加抑制剂对细胞周期的影响。结果显示,抑制剂LY294002的处理对p-PI3K的表达没有明显影响,抑制剂GO6983处理没有明显改变PKC的磷酸化水平,而抑制剂H89能够显著下调PKA的磷酸化水平以及增殖相关蛋白c-MYC、CCND1的表达。综上所述,Reg3g可能通过激活PKA信号通路,调控细胞增殖相关基因的表达,从而促进BRL-3A细胞的增殖。