Kringle5功能区抗肿瘤的研究国内外均尚在实验室规模,其在胰腺癌方面的研究国内尚无报道.胰腺癌的治疗至今仍是一个难以解决的问题.以往的实验治疗研究大多针对胰腺癌细胞本身,而胰腺癌生长和转移与新生血管生成关系的研究开展较少.我们通过观察Kringle5是否有体内外抑制胰腺癌生长、抗血管生成的特性,为进一步进行体内抗血管生成基因治疗胰腺癌奠定基础,最终达到使胰腺癌高转移性表型得以逆转的目的.我们尝试用阳离子脂质体将质粒PUCKRINGLE5体外转染入人胰腺癌PC3细胞株,通过RT-PCR鉴定基因水平转染成功.采用细胞免疫组化观察转染后胰腺癌细胞株有Kringle5蛋白的成功表达.在肿瘤细胞体外研究中,观察了人血纤溶酶原Kringle5基因导入后对胰腺癌细胞增殖能力的影响.MTT法测定结果表明,Kringle5基因转染后的胰腺癌PC3细胞生长受到明显抑制.采用流式细胞仪检测细胞周期,表明Kringle5转染后的胰腺癌细胞G0-G1期比例增高,而S期比例降低,其变化程度与细胞内DNA分子降解程度相近细胞调亡指数增加.扫描电镜观察到胰腺癌PC3细胞的调亡现象.以上研究提示人血纤溶酶原Kringle5基因转染有抑制胰腺癌PC3细胞株生长的作用.此外我们还观察到Kringle5基因转染胰腺癌PC3细胞株培养液上清对血管内皮细胞有生长抑制作用.我们通过PC3胰腺癌细胞皮下注射的方法,成功建立了胰腺癌裸鼠移植瘤模型,进而研究了人血纤溶酶原Kringle5基因对胰腺癌细胞在裸鼠体内增殖的影响及移植瘤血管生成的变化.在裸鼠体内研究阶段经组织免疫组化研究发现,移植瘤胰腺癌PC3细胞表达Kringle5蛋白.通过裸鼠致瘤性分析,观察到转染后移植瘤生长受到抑制.测定移植瘤微血管密度(MVD)可见转染后移植瘤组织血管增生减少,提示转染后移植瘤内血管生成受到抑制.总之,研究提示Kringle5基因具有治疗胰腺癌的潜在价值,即体外抑制胰腺癌细胞增殖、诱导调亡、抑制血管内皮细胞生长,体内抑制胰腺癌移植瘤生长、抑制血管生成.该研究为进一步开展Kringle5基因抗胰腺癌生长及血管生成的基因治疗积累了理论基础及试验依据.