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背景和目的:糖尿病肝损伤（Diabetic liver injury,DLI）是糖尿病的常见并发症。有研究证实铁死亡信号通路在糖尿病合并非酒精性脂肪肝病（Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）中发挥重要作用。芍药苷（Paeoniflorin,PF）是一种从中药芍药和牡丹中提取的单萜类糖苷化合物,因其特殊的药理作用以及多靶点、低毒性等特点被广泛研究。本实验通过体内外实验研究芍药苷对肝脏脂质过氧化和铁死亡相关指标的影响,观察芍药苷对糖尿病肝损伤的潜在疗效。方法:体内实验:取8周龄雄性db/m小鼠12只、db/db小鼠24只,随机分为6组:db/m组;db/m+PF组（100 mg/kg）;db/db组;db/db+PF低剂量、中剂量、高剂量组（25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg）,每组6只。各组每日按照小鼠体重分别灌服等量生理盐水和芍药苷。饲养12周后,完整取肝脏组织并计算肝重体重比值,测定小鼠尾尖血糖、血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平,测定小鼠血清和肝脏甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、游离脂肪酸（FFA）水平,测定小鼠肝脏脂质过氧化最终产物4-羟基壬烯醛（4-HNE）、丙二醛（MDA）含量,测定小鼠肝脏还原型谷胱甘肽（GSH）含量及超氧化物歧化酶（SOD）水平,测定小鼠肝脏还原型谷胱甘肽氧化型谷胱甘肽比值（GSH/GSSG）,测定小鼠肝脏铁含量。通过HE染色观察小鼠肝脏结构变化,DHE染色检测小鼠肝脏ROS水平,免疫组化检测小鼠肝脏ACSL4、GPX4表达情况;Western blot法检测小鼠肝脏ACSL4、LPCAT3、ALOX15、GPX4、FTH1、TFR1和P-AMPK、AMPK、SREBP1、NRF2表达情况;实时荧光定量PCR（q RT-PCR）法检测小鼠肝脏ACSL4、LPCAT3、ALOX15、GPX4和SREBP1、ACC、FASN、SCD1 m RNA水平。体外实验:取AML12细胞,应用高糖干预建立糖尿病肝损伤模型。MTT法检测芍药苷药物毒性、筛选药物最佳作用浓度;Western blot法检测ACSL4、GPX4含量筛选实验时间。在此基础上,分为:正常（NG）组;正常+芍药苷（NG+PF）组（16μmol/L）;甘露醇（M）组;高糖（HG）组;高糖+芍药苷（HG+PF）低剂量、中剂量、高剂量组（4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L）,以上7组。此外,设置高糖+铁死亡抑制剂（HG+Fer-1）组,观察Fer-1对高糖诱导肝细胞损伤的作用效果。DCFH-DA法检测AML12细胞ROS蓄积情况;Western blot法检测ACSL4、LPCAT3、ALOX15、GPX4、FTH1、TFR1和P-AMPK、AMPK、SREBP1、NRF2表达;实时荧光定量PCR（q RT-PCR）法检测ACSL4、LPCAT3、ALOX15、GPX4和SREBP1、ACC、FASN、SCD1 m RNA水平。细胞热位移技术（CETSA）验证芍药苷与AMPK的结合。Western blot法检测使用AMPK抑制剂Dorsomorphin后,芍药苷对NRF2、ACSL4、LPCAT3、ALOX15、GPX4的影响。结果:体内实验:与db/db组相比,芍药苷组小鼠血糖、肝重/体重无明显变化。芍药苷治疗显著改善小鼠肝功能和肝脏脂质沉积,降低小鼠肝脏脂质过氧化产物4-HNE、MDA含量,提高GSH含量和SOD水平。此外,芍药苷给药小鼠肝脏GSH/GSSG升高、铁含量降低。芍药苷治疗明显减轻小鼠肝脏组织病理损伤,减少ROS蓄积。免疫组化结果显示各给药组均能抑制db/db小鼠ACSL4的表达、增加GPX4的表达。Western blot结果显示芍药苷治疗后db/db小鼠肝脏SREBP1、ACSL4、LPCAT3、ALOX15、TFR1蛋白含量下降,P-AMPK、NRF2、GPX4、FTH1蛋白含量升高。此外,芍药苷治疗显著调控铁死亡通路相关基因表达,增加GPX4m RNA水平,降低ACSL4、LPCAT3、ALOX15、SREBP1及其下游基因m RNA水平。体外实验:通过MTT筛选出4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L三个剂量作为芍药苷合适的作用浓度。免疫荧光结果显示高糖干预显著促进AML12细胞内ROS蓄积;Western blot结果显示高糖干预后SREBP1、ACSL4、LPCAT3、ALOX15、TFR1表达增高,P-AMPK、NRF2、GPX4、FTH1表达下降;q RT-PCR检测基因转录水平,高糖组GPX4 m RNA水平降低,ACSL4、LPCAT3、ALOX15、SREBP1及其下游基因m RNA水平上升。芍药苷对AML12细胞具有保护作用,铁死亡相关指标较高糖组均明显改善。同时研究结果显示,Fer-1可抑制高糖诱导的AML12细胞铁死亡,减轻ROS累积,在高糖诱导的肝细胞损伤中,铁死亡发挥着重要作用。通过细胞热位移技术（CESTA）,证实AMPK是芍药苷潜在的作用靶点。使用AMPK抑制剂Dorsomorphin进一步验证,证实芍药苷通过AMPK/SREBP1途径发挥保护作用。结论:芍药苷通过抑制肝脏脂质过氧化和铁死亡,减轻糖尿病并发的肝脏损伤。