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【目的】非对称性二甲基精氨酸(Asymmetrical dimethylarginine ADMA)是一种内源性一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase,NOS)抑制剂,血浆ADMA水平的升高可以预测冠心病的突发事件和病死率,是心血管疾病的独立危险因子,动脉粥样硬化(artherosclerosis,AS)目前被认为是一种炎症和免疫性疾病。本研究通过观察非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟及免疫的影响来探讨AS形成的可能机制。【方法】1、各种细胞的分离和培养::(1)用淋巴细胞分离液从健康成人外周血白细胞悬液分离单个核细胞,用含20 ng/ml rhGM-CSF(recombinant human granulocytemacrophage-colony stimulating factor)、10 ng/ml rhIL-4(recombinant humaninterleukin-4)、10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的RPMl1640培养基培养,第5天收集悬浮细胞作为未成熟DC(immature DC,imDC)2、细胞干预:用1、8、16umol/L的ADMA干预未成熟DC 24 h。3、各种指标的检测:用流式细胞术检测DC细胞表面分子的表达、吞噬能力及DC的凋亡,用混合淋巴细胞反应检测成熟DC刺激T淋巴细胞增殖的能力,用ELISA检测DC细胞因子的分泌。【结果】1.DC的培养和观察:在倒置显微镜下见DC悬浮生长,聚集成簇,有大量胞质突起。2.ADMA对DCs表型的影响:mDC表面CD86、CD83、HLA-DR的表达较imDC明显升高,但CDla变化不大;用ADMA干预后,细胞表面分子的表达与未用ADMA干预的相比设有明显差异,但在ADMA病理浓度下,CDla的平均荧光强度降低,因CDla是DC成熟标志,说明在生理浓度下ADMA并不诱导DC分化,在病理浓度下ADMA可以抑制DC成熟,3.ADMA刺激DC对T淋巴细胞增殖作用:将经不同浓度ADMA刺激的mDC与T淋巴细胞以1:10比例混合培养5天,用MTT法来检测ADMA对MLR的影响。结果如图所示,ADMA干预组的MTT数值明显小于LPS组(P＜0.05,P＜0.01);用16umol/L的ADMA干预产生与对照组有差异的MLR(P＜0.01);ADMA浓度为16umol/L时,T淋巴细胞增殖反而不明显;说明ADMA刺激DC对T淋巴细胞增殖有抑制作用。4.DCs吞噬功能的检测:经ADMA干预后的imDC及未经干预的mDC,与FITC-Dextran在4℃(作阴性对照)或37℃共孵育30 min,用流式细胞术检测细胞的吞噬能力,发现生理浓度ADMA对DC的吞噬能力无明显影响;病理浓度ADMA对DC的吞噬能力有抑制作用,而用LPS干预DC的吞噬能力明显低于对照组,说明成熟DC的吞噬能力较未成熟DC降低5.DCs凋亡的检测:经ADMA干预后的DC,用流式细胞术检测凋亡的百分比,发现16μmol/LADMA.浓度组凋亡的百分比比其它组明显增高(P＜0.05,P＜0.01)6.DCs的细胞因子的分泌功能检测:经ADMA干预后的DC,用ELISA检测IL-12细胞因子的分泌量,结果发现经100ng/mL LPS诱导得到的mDC IL-12细胞因子的分泌量明显增多(P＜0.01),ADMA干预组在浓度为8μmol/L和16μmol/L时IL-12细胞因子的分泌量明显减少(P＜0.01)经ADMA干预后的DC,用ELISA检测TNF-α分泌量,结果发现经100 ng/mLLPS诱导得到的mDC及不加任何刺激因子TNF-α分泌量明显增多(P＜0.01),ADMA干预组在浓度为16μmol/L时TNF-α分泌量明显减少(P＜0.01),【结论】1.生理浓度ADMA并不刺激DC成熟及分化;但病理浓度ADMA抑制DC成熟;2.病理浓度ADMA抑制DC诱导的T淋巴细胞增殖;3.病理浓度ADMA抑制DC的吞噬功能;4.病理浓度ADMA诱导DC凋亡;5.病理生理浓度ADMA抑制DC分泌IL-12细胞因子、TNF-α及IL-10细胞因子。