拟南芥非特异性转脂蛋白1与钙调素结合活性的研究

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钙调素(CaM)是Ca2+信号转导系统中极其重要的组成部分,其诸多调节功能是通过与其结合蛋白(CaMBP)的相互作用而实现的。因此钙调素结合蛋白的研究对了解Ca2+/CaM信号转导系统有重要意义。CaMBP-10为本研究组近年在中国大白菜中发现并分离到的一种新的具有重要生理意义的钙调素内源结合蛋白,在前期的研究中已经得到CaMBP-10成熟蛋白的cDNA全序列,以及mRNA的5’和3’非编码区序列,并在大肠杆菌中成功表达了重组CaMBP-10.通过序列比对和生化性质比较,确认CaMBP-10是植物非特异性转脂蛋白家族(nsLTPs)中的新成员,首次将CaM和nsLTPs联系到一起。 为了进一步验证与CaM结合的性质是否普遍存在于nsLTPs中,并对nsLTPs与CaM的结合模式进行初步的探讨,我们用分子生物学方法克隆得到模式植物拟南芥的非特异性转脂蛋白1(nsLTP1)cDNA,并使其在大肠杆菌中表达。凝胶覆盖鉴定和pull-down分析结果证明,nsLTP1具有与CaMBP-10完全相同的CaM结合特性,其结合部位位于成熟蛋白的69-80位氨基酸之间,也几乎与CaMBP-10完全一致。尤为值得注意的是,这一段序列在植物非特异性转脂蛋白中是高度保守的,甚至被认为是nsLTPs的“标签”序列,说明CaM结合性质可能为植物非特异性转脂蛋白家族所共有,它们可能是一类新的钙调素结合蛋白。这一结果将有助于揭示CaM、nsLTPs在植物脂类代谢、防御和适应机能中的功能和作用,拓宽对Ca2+/CaM调节体系的全面认识。
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