论文部分内容阅读
视神经损伤是临床上常见的眼外伤类型,它可能造成患者视功能不可逆性的丧失,目前临床上尚缺乏有效的治疗手段。视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的凋亡被认为是视神经损伤后视功能丧失的主要原因。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和雪旺细胞(Schwann cell,SC)在体外和体内实验中均能促进RGC存活,并能阻止其在视神经损伤后发生凋亡,但二者的效果较为局限。在本研究中,我们试图应用BDNF基因修饰的SC来探讨治疗视神经损伤的新途径。 目的 (1)使用重组腺病毒将外源性BDNF基因转移到体外培养的大鼠源性SC中,制备高度表达BDNF且安全可靠的SC。(2)将感染后SC与牛去细胞基质(bovine acellular matrix,BAM)制备成复合物,观察其中感染后SC的生长情况和BDNF的表达情况。(3)将感染后SC-BAM复合物填充至大鼠视神经夹伤模型的损伤局部,观察其对RGC和视功能的保护作用。 方法 (1)使用含有人BDNF基因的重组腺病毒载体,经不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)病毒量感染体外培养的大鼠源性SC。RT-PCR和Western blot检测感染后72h的感染效率,进一步用高感染效率下的MOI病毒量感染SC,ELISA定量分析感染后3d、6d、9d、12d、15d、18d和21d时在感染后SC培养液上清中BDNF的表达。(2)观察感染后21d内SC的生长状态。采用MTT试验对比感染后SC和正常SC的生长曲线,并采用间接荧光染色对比二者在感染后72h时胞浆中BDNF表达的情况。(3)将感染后24h的SC和BAM混合后培养以制备感染后SC-BAM复合物,观察培养后21d内的感染后SC的生长状态和复合物的降解情况。采用透射电镜观察其中的感染后SC和胶原纤维的关系。ELISA定量分析培养后3d、6d、9d、12d、15d、18d和21d复合物中