脑源性神经营养因子基因修饰的雪旺细胞对大鼠视神经损伤后的保护作用

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视神经损伤是临床上常见的眼外伤类型,它可能造成患者视功能不可逆性的丧失,目前临床上尚缺乏有效的治疗手段。视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的凋亡被认为是视神经损伤后视功能丧失的主要原因。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和雪旺细胞(Schwann cell,SC)在体外和体内实验中均能促进RGC存活,并能阻止其在视神经损伤后发生凋亡,但二者的效果较为局限。在本研究中,我们试图应用BDNF基因修饰的SC来探讨治疗视神经损伤的新途径。 目的 (1)使用重组腺病毒将外源性BDNF基因转移到体外培养的大鼠源性SC中,制备高度表达BDNF且安全可靠的SC。(2)将感染后SC与牛去细胞基质(bovine acellular matrix,BAM)制备成复合物,观察其中感染后SC的生长情况和BDNF的表达情况。(3)将感染后SC-BAM复合物填充至大鼠视神经夹伤模型的损伤局部,观察其对RGC和视功能的保护作用。 方法 (1)使用含有人BDNF基因的重组腺病毒载体,经不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)病毒量感染体外培养的大鼠源性SC。RT-PCR和Western blot检测感染后72h的感染效率,进一步用高感染效率下的MOI病毒量感染SC,ELISA定量分析感染后3d、6d、9d、12d、15d、18d和21d时在感染后SC培养液上清中BDNF的表达。(2)观察感染后21d内SC的生长状态。采用MTT试验对比感染后SC和正常SC的生长曲线,并采用间接荧光染色对比二者在感染后72h时胞浆中BDNF表达的情况。(3)将感染后24h的SC和BAM混合后培养以制备感染后SC-BAM复合物,观察培养后21d内的感染后SC的生长状态和复合物的降解情况。采用透射电镜观察其中的感染后SC和胶原纤维的关系。ELISA定量分析培养后3d、6d、9d、12d、15d、18d和21d复合物中
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