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目的：1.构建WWOX基因过表达慢病毒重组质粒载体并完成相关鉴定；2.研究上调WWOX基因对人Jurkat及K562白血病细胞生物学特性的影响；3.初步探讨其生物学特性改变的相关分子机制。方法：1.通过PCR扩增获得目的基因WWOX全长cDNA片段，纯化后经Age I酶切消化。同时用Age I酶对载体质粒进行酶切、回收得到线性化载体片段。经T4噬菌体DNA连接酶作用将WWOX连接至线性化载体，连接产物经转化、涂板、挑取克隆、扩增培养后，用质粒小量抽提试剂盒提取质粒，酶切后PCR凝胶电泳鉴定连接产物，并行序列测定。将构建好的融合基因表达载体进行病毒颗粒包装，得到WWOX过表达慢病毒重组质粒载体系统（pGC-FU-WWOX-GFP和pGC-FU-GFP）。采用qPCR、Western blot等方法对重组载体进行鉴定。2.采用CCK-8比色、集落形成实验、DAPI染色、DNA片段电泳、Annexin V PE/7-AAD双荧光标记、Western blot等方法，研究上调WWOX对Jurkat和K562细胞生物学特性的影响。3.间接免疫荧光检测凋亡相关蛋白p53、p73、NF-κBp65及细胞色素C（Cytochrome C，Cyto C）等的表达及定位。qPCR、Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyto C、Caspase-9、Caspase-3、p53、p73及NF-κB p65等凋亡相关蛋白的表达变化。免疫共沉淀、Western blot检测WWOX与p73、p53之间的相互作用。结果：1.测序鉴定结果与目标序列完全一致，包装后的慢病毒经qPCR测定滴度约为2×108TU/ml。2. WWOX重组慢病毒质粒感染Jurkat及K562细胞48h后，观察到GFP稳定表达。qPCR显示pGC-FU-WWOX组细胞WWOX在mRNA水平表达增加。Western blot检测到约72kD的融合蛋白（WWOX融合GFP）表达，随时间延长，融合蛋白表达呈增加趋势。CCK-8比色实验显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组的细胞生长较两对照组明显受抑制（P＜0.05）。集落形成实验表明，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞集落形成率较两对照组显著降低（P=0.000）。DAPI染色显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞核呈现Ⅱb晚期凋亡形态。DNA片段电泳显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组出现明显的梯状降解条带，并随时间延长梯状条带生成更加明显。Annexin V PE/7-AAD双荧光染FCM检测显示，Jurkat和K562pGC-FU-WWOX组细胞48h、72h、96h的凋亡率明显高于其他两对照组（P＜0.001），主要为凋亡中、晚期细胞。3.间接免疫荧光染色可见，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞Cyto C在胞质中呈弥散或粗块状分布，而p53、p73及NF-κB p65均定位于胞质，较对照组表达差异不明显。qPCR及Western blot显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组较其他两对照组Bcl-2表达呈下降趋势，Cyto C表达增加，同时两细胞均有Caspase-9和Caspase-3的剪接激活，而p53表达变化不明显。K562细胞中Bax表达呈上升趋势。免疫共沉淀后SDS-PAGE电泳染色显示，Jurkat和K562细胞pGC-FU-WWOX组均于约73～74kD处出现浓染的蛋白条带，而其他两对照组蛋白条带染色为阴性。蛋白印迹在两种细胞的pGC-FU-WWOX组均检测到p73及WWOX的表达，而未检测到p53蛋白的表达。结论：1.成功构建WWOX基因慢病毒重组载体。2. WWOX过表达可明显抑制Jurkat和K562细胞增殖，诱导细胞凋亡。3. WWOX过表达均可使Jurkat和K562白血病细胞中Bcl-2表达下调，Cyto C表达增多，同时均可激活Caspase-9和Caspase-3的表达剪接，推测通过激活内源性线粒体途径可能是WWOX抑癌机制之一。4. Jurkat和K562白血病细胞中，上调的WWOX可直接与p73结合，参与诱导细胞凋亡的过程。