【摘 要】
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鸭瘟是由鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）感染鸭等引起的严重传染病。通过弱毒疫苗免疫是控制鸭瘟的重要举措,由于目前缺乏能区分鸭瘟强毒感染与弱毒疫苗免疫鸭血清抗体的方法,使得拟通过免疫来净化DPV感染的方案缺乏技术支撑。本研究基于DPV-gI、DPV-UL2原核表达蛋白,研制了能够鉴别鸭瘟强毒感染与弱毒疫苗免疫鸭血清抗鸭瘟抗体的胶体金试纸。结果如下:1.基于DPV-gI检测鸭瘟血
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鸭瘟是由鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）感染鸭等引起的严重传染病。通过弱毒疫苗免疫是控制鸭瘟的重要举措,由于目前缺乏能区分鸭瘟强毒感染与弱毒疫苗免疫鸭血清抗体的方法,使得拟通过免疫来净化DPV感染的方案缺乏技术支撑。本研究基于DPV-gI、DPV-UL2原核表达蛋白,研制了能够鉴别鸭瘟强毒感染与弱毒疫苗免疫鸭血清抗鸭瘟抗体的胶体金试纸。结果如下:1.基于DPV-gI检测鸭瘟血清抗体的胶体金试纸研制IPTG诱导含鸭瘟病毒糖蛋白I（gI）的pET-32a/gI重组质粒的大肠杆菌Rosetta（DE3）进行表达,收获菌体,超声波破碎,收集包涵体,切胶纯化获得大小为65 k Da左右gI蛋白。胶体金标记gI蛋白制备金标抗原,gI蛋白划线于NC膜形成检测线。经优化,最适胶体金标记gI浓度为100μg/m L,最适gI蛋白划线浓度为2.5 mg/m L。该试纸条检测鸭瘟阳性血清的灵敏性为1:256,低于ELISA但高于中和实验,肉眼观察15 min内可得到结果;与鸭抗鸭瘟病毒、鸭抗鸭疫里默氏杆菌、鸭抗沙门氏菌、鸭抗巴氏杆菌、鸭抗坦布苏病毒、鸭抗鸭肝炎1型、鸭抗鸭肝炎3型阳性血清呈阴性反应,特异性好。该胶体金试纸与ELISA方法的符合率达83.7%,于4℃密封环境中可以保存至少10个月。2.鉴别鸭瘟强毒感染与弱毒疫苗免疫血清抗体的胶体金试纸研制IPTG诱导含鸭瘟病毒UL2基因的pET-28a/UL2重组质粒的大肠杆菌Rosetta（DE3）表达,收获菌体,超声波破碎,收集包涵体,切胶纯化获得,大小为19.8 k Da左右的UL2目的蛋白。胶体金分别标记UL2和gI蛋白作为示踪物,UL2和gI蛋白分别划线于NC膜上作为检测线T1和T2,研制鉴别鸭瘟强毒感染与弱毒疫苗免疫鸭血清抗体的胶体金试纸。该试纸检测鸭瘟阳性血清的灵敏性达1:100,肉眼15 min内可得到结果;该胶体金试纸不与其他常见病原体感染鸭血清（鸭瘟、鸭疫里默氏杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、坦布苏病毒、1型鸭肝炎、3型鸭肝炎）发生反应,具有良好的特异性;与UL2-ELISA共同检测临床样品,两者符合率高达89.4%。综上,本研究研制的检测鸭瘟血清抗体及鉴别鸭瘟强毒感染与弱毒疫苗免疫血清抗体的胶体金试纸,具有快速、灵敏、准确、简便的优点,适合临床上现场大批量样品快速检测筛选。
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