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OSCC（oral squamous cell carcinoma,口腔鳞状细胞癌）恶性程度高、危害性大,是HNSCC（head and neck squamous cell carcinoma,头颈部鳞状细胞癌）中发生率较高的肿瘤。本课题组前期对收集到的部分OSCC临床样本分别进行了外显子测序和转录组测序,发现在部分OSCC样本中存在FAT1基因突变及FAT1 mRNA表达上调的现象,这提示我们FAT1在OSCC发生发展中可能发挥一定的作用,但是目前关于FAT1在OSCC中相关功能和分子机制的研究很少。因此,本课题拟研究FAT1对OSCC增殖、迁移和凋亡的影响,并初步探讨其发挥作用可能的分子机制。本研究将从以下三个方面进行:一、FAT1在口腔鳞状细胞癌中表达水平的变化目的:研究FAT1 mRNA及蛋白在OSCC中表达水平的变化。方法:1.通过TCGA（The Cancer Genome Atlas）公共数据库,研究FAT1 mRNA在人体多种癌症中表达水平的变化;FAT1 mRNA表达水平与HNSCC患者总体生存率之间的关系;HNSCC中FAT1启动子甲基化水平的变化;2.采用Real-time PCR研究FAT1 mRNA在OSCC临床样本中表达水平的变化;3.采用免疫组化研究FAT1非典型钙粘素在OSCC中表达水平的变化,并结合患者资料分析FAT1非典型钙粘素表达水平与肿瘤的临床特征、患者生存率之间的关系。结果:1.FAT1 mRNA在人体多种癌症中表达上调;HNSCC患者的癌组织中FAT1 mRNA的表达水平与患者的总体生存率呈负相关;HNSCC中FAT1启动子甲基化水平没有明显变化;2.FAT1 mRNA在OSCC中表达上调;3.FAT1非典型钙粘素在OSCC中表达上调,且肿瘤侵袭前沿FAT1非典型钙粘素的表达水平与肿瘤的分化程度呈负相关。结论:FAT1可能发挥促进OSCC发生发展的作用。二、FAT1基因在口腔鳞状细胞癌中的突变情况以及这些突变对FAT1表达水平的影响目的:研究OSCC中FAT1基因的突变情况以及这些突变对FAT1 mRNA表达水平的影响。方法:1.通过公共数据库cBio Portal for Cancer Genomics,研究FAT1在HNSCC中的突变率;2.通过COSMIC（The Catalogue Of Somatic Mutation In Cancer,肿瘤中体细胞突变的目录）,选取适当的突变位点,通过Sanger测序研究FAT1在OSCC的癌组织、癌旁组织和正常人外周血中突变率的差异;3.通过Real-time PCR研究OSCC中FAT1点突变对FAT1 mRNA表达水平的影响。结果:1.FAT1在HNSCC中的突变率为26%;2.HNSCC中,FAT1的突变位点比较分散,没有比较常见的热点突变;最终选择了404、614、1662和3554四个位点对OSCC的癌及癌旁组织和正常人外周血进行Sanger测序,结果发现癌组织中FAT1的确存在较高比率的突变,但是在癌旁组织及正常人外周血中也存在相应比率的突变;3.OSCC的癌组织中,FAT1在四个位点上的突变对其mRNA表达水平均无显著影响。结论:在OSCC中,FAT1基因的点突变可能仅仅属于单核苷酸多态性。三、FAT1表达水平的改变对口腔鳞状细胞癌细胞系功能的影响目的:研究FAT1表达水平的改变对OSCC细胞系增殖、迁移能力和凋亡率的影响。方法:1.构建针对人FAT1基因的小干扰siRNA和以慢病毒为载体的小向导RNA（sgRNA）、短发夹RNA（shRNA）,并用构建好的siRNA转染OSCC细胞系,sgRNA、shRNA慢病毒感染OSCC细胞系,分别通过错配修复酶切割分析法检测FAT1基因是否发生突变、Real-time PCR检测FAT1 mRNA表达水平的改变及WB检测FAT1非典型钙粘素表达水平的改变;2.FAT1表达水平改变后,采用CCK-8及平板克隆形成实验研究OSCC细胞系增殖能力的变化;采用划痕愈合实验和迁移小室实验研究OSCC细胞系迁移能力的变化;采用流式细胞术研究OSCC细胞系凋亡率的变化;3.运用WB研究FAT1表达水平改变后Hippo信号通路中部分蛋白表达水平的变化。结果:1.用针对人FAT1的sgRNA慢病毒感染OSCC细胞系后,实验组FAT1基因发生了点突变但FAT1非典型钙粘素表达水平无明显变化;shRNA慢病毒感染OSCC细胞系后,实验组FAT1 mRNA表达下调但FAT1非典型钙粘素表达水平无明显变化;siRNA转染OSCC细胞系后,实验组FAT1 mRNA和FAT1非典型钙粘素的表达水平均下降;2.FAT1基因发生错配突变或FAT1 mRNA表达下调,但FAT1非典型钙粘素表达水平未发生改变时,OSCC细胞系的增殖和迁移能力未发生显著的变化。但当FAT1 mRNA及FAT1非典型钙粘素的表达同时下调后,细胞系的增殖和迁移能力减弱,细胞系的凋亡率升高;3.OSCC细胞系中FAT1非典型钙粘素表达下调会引起Hippo信号通路中部分基因的蛋白表达发生改变。结论:FAT1表达下调可以改变Hippo信号通路的活性,从而抑制肿瘤细胞的增殖和迁移能力,提高细胞的凋亡率。