miRNAs在肾癌中的表达及功能研究

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目的:  研究miRNAs(miR-122,-210,-363)在肾癌中的表达及临床相关性,并探讨miR-122在肾癌中的功能作用。  方法:  1.本研究主要采用RT-qPCR方法检测miRNAs在肾癌中的表达情况。在本研究组前期第二代大规模平行测序的基础上,对51例肾癌及其癌旁组织样本、20例肾癌及正常对照外周血样本分别进行RNA的抽提,然后将提取的RNA逆转录为cDNA,再应用RT-qPCR方法进一步验证miRNAs(miR-122,-210,-363)在肾癌与正常对照样本中的表达差异,最后对miRNAs与肾癌患者的临床病理特征之间的的相关性进行深入分析。  2.本研究主要采用细胞转染试验对肾癌中miR-122的功能作用进行深入探讨。通过转染细胞后,分别进行MTT试验和划痕试验来分析细胞增殖、迁移和侵袭的程度变化,进而探讨miR-122在肾癌发生发展过程中的作用。  结果:  1.与相应的对照组比较,miR-122和miR-210在肾癌患者的组织和外周血中表达均显著升高,其中miR-122分别上调约19.74倍(P﹤0.05)、24.11倍(P﹤0.05),miR-210分别上调约7.00倍(P﹤0.05)、7.87倍(P﹤0.05);miR-363在肾癌组织中表达明显下调,平均下调约11.49%(P﹤0.05),然而在肾癌外周血中却表现为表达显著升高,平均上调约13.82倍(P﹤0.05)。且miR-363的相对表达水平与肾癌患者的年龄、病理分型及分期显著相关(P﹤0.05)。2.细胞转染后,MTT试验结果显示,与相应的negative control组和空白组比较,转染pre-miR-122后肾癌细胞的增殖率明显升高,转染miR-122 inhibitor后肾癌细胞增殖率显著降低(P﹤0.05);划痕试验结果显示,转染pre-miR-122后肾癌细胞的迁移和侵袭能力增强,而转染miR-122 inhibitor后肾癌细胞的迁移和侵袭能力减弱。  结论:  1.miR-122、miR-210和miR-363可能作为肾癌的肿瘤标志物,对肾癌的早期诊断有潜在的临床意义。  2.miR-122、miR-210和miR-363在肾癌的进展过程中可能发挥了重要的生物学作用,miR-122可能作为致癌基因促进了肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭的能力。
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