研究背景及目的胰腺癌是癌中之王,具有早诊困难、进展迅速、预后极差的特点。超过80%的胰腺癌患者在初诊时已失去了手术机会。由于广泛的肿瘤间质浸润及纤维化,胰腺癌即使对一线化疗药吉西他滨也不敏感。因此,寻找可以协助早期诊断、提高化疗敏感性的分子靶点,对改变目前胰腺癌诊治状况而言十分重要。本课题组前期实验对人胰腺癌细胞进行了全外显子测序,结果显示CDHR5基因(Cadhe-rin-related Family Member 5)在胰腺癌和癌旁样本中的表达情况存在明显差异。CDHR5基因所编码的蛋白为跨膜蛋白CDHR5,属于钙离子依赖的细胞黏附分子家族。该蛋白主要由四个结构域组成,包括胞外的钙黏蛋白结构域和黏蛋白结构域,以及胞内的富含脯氨酸结构域及PDZ结合区。钙黏蛋白结构域发挥着介导细胞间粘附的作用;而黏蛋白结构域的功能目前尚不清楚,研究推测其与细胞运动以及细胞的可塑性相关;胞内富含脯氨酸的结构可与SH3结构域相结合,发挥传导胞外信号的作用;而PDZ结合区则可帮助该蛋白集中分布于上皮细胞的基底外侧膜。生理情况下,CDHR5蛋白广泛分布于肾脏、肺脏、肠道等器官的上皮细胞表面,在细胞粘附以及多种器官的分枝化形态发生过程等方面起到关键作用。而在肾癌与结直肠癌中的研究则表明,CDHR5蛋白在肿瘤细胞表面处于低表达状态,并且该蛋白的低表达与肿瘤患者的较差预后密切相关。然而,目前尚无关于CDHR5蛋白在胰腺癌中作用的研究报道,因此本课题将初步探究CDHR5蛋白对胰腺导管腺癌细胞的影响及相关机制。本研究拟对胰腺癌中CDHR5表达与各项临床指标间的关系,以及其对胰腺癌恶性表型的影响及相关机制进行初步研究。研究内容1.研究胰腺癌组织中CDHR5蛋白的表达情况及与胰腺导管腺癌患者临床特征及预后的关系。2.研究CDHR5蛋白在胰腺导管腺癌发生演进过程中的表达水平的变化。3.研究CDHR5蛋白及对胰腺导管腺癌细胞株增殖、侵袭及迁移的影响。4.初步探索CDHR5蛋白对胰腺导管腺癌细胞影响的机制。研究方法1.应用免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)检测并分析经病理诊断为胰腺癌及癌旁组织的标本中CDHR5蛋白的表达情况,分析CDHR5表达水平与胰腺癌临床病理特点及胰腺癌患者预后的关系。2.应用免疫组织化学技术检测并分析经病理诊断为胰腺炎、胰腺上皮内瘤变及胰腺癌的标本中CDHR5蛋白的表达情况,分析CDHR5表达水平在胰腺导管腺癌发生演进过程中的表达水平的变化。3.应用Western blot及qPCR技术检测各胰腺癌细胞株细胞中CDHR5的基础表达情况,筛选出相对高表达CDHR5蛋白的胰腺癌细胞株。应用siRNA转染技术敲低高表达细胞株中的CDHR5表达水平,随后利用CCK8法检测CDHR5对胰腺癌细胞增殖的影响;利用transwell法检测CDHR5对胰腺癌细胞侵袭及转移的影响。4.应用及qPCR技术检测各胰腺癌细胞株细胞中CDHR5异构体的表达情况。研究结果1.与癌旁正常导管细胞相比,CDHR5在人胰腺导管腺癌肿瘤细胞的细胞膜上呈高表达状态,CDHR5表达水平是影响胰腺癌患者术后生存期的独立危险因素,CDHR5高表达与胰腺癌患者预后不良相关。2.CDHR5表达水平在胰腺癌发生演进过程中呈现明显升高趋势,其在胰腺癌及高级别PanIN中的表达水平显著高于其在慢性胰腺炎组织中的表达水平(P<0.01)。3.CDHR5的高表达能够显著提升胰腺癌细胞株AsPC-1的侵袭及转移能力。4.长链CDHR5异构体在腹水转移癌来源的胰腺癌细胞株AsPC-1中的表达水平显著高于其他原位癌来源的胰腺癌细胞株。研究结论CDHR5的高表达与胰腺导管腺癌患者的临床预后显著相关,其表达水平在胰腺癌发生演进过程中呈现明显升高趋势;CDHR5可增强胰腺癌细胞的侵袭及转移能力;长链CDHR5异构体可能对胰腺癌细胞的侵袭及转移能力存在调控作用。