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随着畜牧业和饲料工业的蓬勃发展,饲料添加剂的使用日趋广泛。抗生素、激素、促生长剂等人工合成饲料添加剂在畜牧业的长期大量应用,动物性食品的安全问题已引起人们的关注。解决这一问题的关键就是要严格控制奶牛饲料的安全,用绿色饲料添加剂替代普通饲料添加剂。
本研究通过药理学试验方法探讨柑橘黄酮对实验动物的免疫机能、抗氧化、抗菌抗炎、生长性能等的影响,为柑橘黄酮作为奶牛饲料添加剂的开发利用提供基础实验依据。
1.采用分光光度法测定柑橘黄酮中总黄酮的含量,采用高效液相色谱法测定橙皮苷的含量。结果柑橘黄酮中总黄酮的含量为12.30%;橙皮苷的含量为5.72%。
2.小鼠灌胃最大受试药物量测定结果显示,柑橘黄酮小鼠灌胃给药的最大量为17.86g·kg<-1>·d<-1>,提示柑橘黄酮毒性小,安全性好。
3.小鼠腹腔注射不同剂量(200、600 kg<-1>·d<-1>)的柑橘黄酮,连续给药9天,测定小鼠日增重、日采食量。结果表明,低剂量(200kg<-1>·d<-1>)的柑橘黄酮可使雌鼠的日增重增加9.35%,日采食量增加6.59%,但无统计学意义。提示柑橘黄酮(200kg<-1>·d<-1>)对雌性小鼠的生长有一定的促进作用。
4.小鼠腹腔注射不同剂量(200、600kg<-1>·d<-1>)的柑橘黄酮,连续给药9天,测定小鼠免疫器官的脏器指数。结果表明,柑橘黄酮不同剂量组(200、600kg<-1>·d<-1>)的雌鼠脾指数和胸腺指数均明显高于对照组(P<0.05)。提示柑橘黄酮对雌性幼年小鼠有免疫增强作用。
小鼠腹腔注射不同剂量(200、600kg<-1>·d<-1>)的柑橘黄酮,连续给药20天,测定小鼠巨噬细胞吞噬血中刚果红溶液的能力。结果显示,柑橘黄酮各剂量组小鼠巨噬细胞对血中刚果红的吞噬能力明显高于对照组(P<0.01)。提示柑橘黄酮能增强巨噬细胞的吞噬能力,增强机体非特异性免疫功能。
5.用D-半乳糖(D-galactose,1g·kg<-1>·d<-1>)建立小鼠衰老模型,同时分别灌胃给予不同剂量(200、600kg<-1>·d<-1>)的柑橘黄酮。给药42天后测定肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。结果表明,柑橘黄酮显著升高D-半乳糖致衰老小鼠的肝脏SOD酶活性(P<0.05和P<0.01),同时明显降低肝脏MDA水平(P<0.05和P<0.0 1)。提示柑橘黄酮具有较强的抗氧化作用。
6.采用试管稀释法测定柑橘黄酮的抑菌作用,对5种常见细菌以及2种真菌的最低抑菌浓度(MIC)进行了测定。结果表明,柑橘黄酮对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌作用最强、对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌及乙型副伤寒沙门菌次之、对白色念珠菌和黑曲霉无抑菌作用。
7.SD雌性大鼠受孕第一天开始,灌胃不同剂量的柑橘黄酮(200、600mg·kg<-1>·d<-1>)直至产下子鼠后处死。孕鼠于产后72h,经乳头管灌注大肠杆菌内毒素,建立大鼠乳腺炎模型,灌注后24 h处死大鼠,取乳腺组织固定,进行病理组织学观察,同时测定血清中碱性磷酸酶(AKP)的含量。结果表明,高剂量组(600mg·kg<-1>·d<-1>)柑橘黄酮能使内毒素诱发的大鼠乳腺炎的炎症反应减轻,柑橘黄酮高剂量组AKP的含量明显低于模型组(P<0.01)。提示柑橘黄酮具有一定的抗炎作用。
综上所述,柑橘黄酮毒性小,安全性高,具有抗氧化、抗炎、抗菌作用,并具有一定的免疫增强作用以及一定的促生长作用,本研究结果对该提取物作为奶牛饲料添加剂的开发具有一定的指导作用。但其在奶牛体内是否具有以上的作用还有待于进一步的研究。