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实验目的: 脉络膜黑色素瘤是成年人最常见的原发性眼内恶性肿瘤。该病转移早，预后差，生存率低，治疗常需联合化疗。但传统化疗药物抗癌效率低，副作用大。本课题组在前期研究中发现，以羟基石墨烯聚乙二醇作为药物载体，可极大地加强传统化疗药物的靶向性和肿瘤杀伤力。同时，由于纳米载药体系通过表面修饰和官能团化，可聚集并滞留在肿瘤部位，增强了对实体肿瘤的靶向杀伤力。本研究进一步确认了纳米载体羟基石墨烯(GOH)对细胞的基因安全性，以此为载体合成羟基石墨烯聚乙二醇载阿霉素体系(GOH-PEG/DOX)，从体外肿瘤模型和体内肿瘤模型检测其抗癌效果，进一步深入探索其在抗脉络膜黑色素瘤治疗中的应用。 实验方法: 1) GOH-PEG/DOX体系的合成及表征:通过球磨KOH与石墨固体粉末制得羟基石墨烯，再利用化学氧化，与聚乙二醇(PEG)共价结合获得GOH-PEG，最后在COG-PEG的表面通过物理静电吸附接载阿霉素，构建GOH-PEG/DOX体系。通过傅里叶红外表征、拉曼表征和紫外分光光度计法证明GOH-PEG/DOX构建成功，并计算阿霉素载药率。 2)单细胞凝胶电泳（彗星实验）:将经不同浓度GOH溶液培养后的ARPE-19细胞，裂解、解螺旋后，置于电泳槽中电泳，用染料对DNA进行染色，通过观察和计算DNA迁移的长度判断GOH对ARPE-19是否具有基因毒性。 3)流式细胞检测:将经过GOH溶液培养后的ARPE-19细胞，进行双染后，通过流式细胞仪检测各组凋亡水平。 4)3D肿瘤模型实验:以凝胶悬滴法将人眼脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1制成3D细胞体外肿瘤模型，加入GOH-PEG/DOX，通过测量肿瘤模型的长轴和短轴来计算体积，并与传统DOX治疗效果作对比，检验纳米载药体系对体外实体肿瘤的渗透性及杀伤力。 5)体内肿瘤模型实验:在裸鼠左侧腋下注射OCM-1细胞，建立OCM-1肿瘤小鼠模型，给药后，监测小鼠体重及肿瘤体积变化，评价载药体系的体内抗肿瘤效果。取各组的肿瘤组织和全身重要脏器（心、肝、肾、肺）进行石蜡切片、HE染色，观察病理生理变化。 实验结果: 1) GOH-PEG/DOX的表征结果:从红外光谱、拉曼光谱等证明GOH-PEG/DOX体系构建成功。并计算得到GOH-PEG/DOX中DOX的载药率为56.4％，包封率为64.8％。 2)彗星实验:50μg/ml浓度以下的GOH组的彗尾DNA百分率没有明显增加。浓度达到100μg/ml时，彗尾DNA百分率略高于阴性对照组，但即使在培养72小时后，增加量在5％以内，远远低于阳性对照组。 3)流式细胞检测:在各个浓度GOH组中，正常存活的ARPE-19细胞的百分率均高于阴性对照组，凋亡细胞所占的百分率均比阴性对照组低。 4)3D肿瘤模型实验:GOH-PEG/DOX的抗癌效果随着时间及作用浓度的增加，对肿瘤体积的抑制作用呈正比。与传统DOX相比，GOH-PEG/DOX显示出更强的抑制效果，50μg/ml作用72小时肿瘤体积可减小近40％，远大于同浓度同时间的DOX作用效果（20％左右）。 5)体内肿瘤模型实验:GOH-PEG/DOX组的小鼠体重下降比DOX组更少到中后期甚至有所增长，GOH-PEG/DOX组比DOX组小鼠体重多增加0.5g左右。与此相反，GOH-PEG/DOX组的肿瘤体积增长缓慢，实验结束时，无治疗组肿瘤体积增长225％， DOX组增长90％，而GOH-PEG/DOX组增长小于40％且有下降趋势。HE染色显示，肿瘤切片上细胞排列紊乱，多形性明显，细胞核深染，核浆比例大。GOH-PEG/DOX组肿瘤切片显示明显坏死。在心脏和脾脏的组织切片中没有发现异常，在GOH-PEG/DOX组的肾和肺切片中发现了棕色类圆形小颗粒。在肺组织切片中，无治疗组发现大的转移瘤，在DOX组中可见较小的转移瘤，但是在GOH-PEG/DOX组没有明显的转移瘤生成。 实验结论: 本研究证实，GOH-PEG/DOX可以被成功合成，其中DOX的装载率约为56.4％，包封率约为64.8％。GOH纳米载体本身对细胞无明显基因毒性，具有极高的安全性，可以作为药物载体用于生物体内。与传统化疗药物DOX相比，我们所构建的GOH-PEG/DOX对体外实体肿瘤模型具有更好的渗透力、更强的杀伤力，可快速有效地缩小肿瘤体积。GOH-PEG/DOX载药体系的体内抗肿瘤效果亦强于DOX，瘤体积明显小于DOX组，同时由于其药物靶向性，对肿瘤小鼠的健康影响更小，肿瘤小鼠的生存质量更高。除了抑制肿瘤本身，GOH-PEG/DOX还有效阻止肿瘤细胞的转移，极大地提高了生存率。因此我们认为，羟基石墨烯聚乙二醇载药体系可极大地增强传统化疗药物的肿瘤杀伤性，并使药物具有靶向性，减少对正常组织器官的伤害，控制肿瘤增长的同时可阻止肿瘤细胞的远处转移，极大地提高肿瘤小鼠的生存质量及生存率，为临床抗脉络膜黑色素瘤的治疗提供了极有意义的科研数据，具有很大的临床应用前景。