目的:肝细胞癌（hepatacellular carcinoma,HCC）是原发性肝癌的一种组织学亚型,是临床常见的恶性肿瘤。肝动脉化学栓塞术（transcatheter arterial chemoembolization,TACE）是目前国内外治疗中晚期不可切除肝癌的首选方案[23-24]。近些年来,人们对肠道菌群功能的认知逐步加深,越来越多的证据表明肠道微生态的失衡可能通过免疫、代谢和营养等多种途径影响肝癌的发生及发展,与肝癌的病因学密切相关[21-22],但是肝癌患者TACE治疗后肠道微生物菌群是否发生改变,以及这种微生物菌群改变对TACE疗效有何影响,是否对肝癌患者的远期生存起到正向收益效果暂不明确。本次实验通过运用16S rDNA测序技术观察HCC患者TACE治疗后肠道菌群变化,为HCC患者TACE治疗过程中防治肠道菌群失调提供了理论、实验基础。方法:选取2019年1月-2019年12月31日海南医学院附属第一医院初诊为原发性肝癌的30例患者。所有入组患者均接受TACE治疗,分别在接受TACE治疗前1天、TACE治疗后1周内各采集新鲜粪便一次,新鲜样本存储于细胞冷冻管内并转移至-80℃冰箱内。使用干冰运输至广州锐博生物科技有限公司,由该公司对HCC患者粪便样本中的DNA进行16S rDNA测序分析,统计分析HCC患者样本中菌群多样性以及TACE前、后肠道菌群差异性进行生物学分析。结果:1.入组30个HCC患者共60例样本中,54例样本浓度达到实验要求,7例样本浓度不合格,TACE术前及术后样本同时合格病例数为26人。将预处理的读取聚类成OTUs,所有合格样本的OTU数量皆在50000-100000之间,说明样本物种较为丰富。2.测算Ace指数、Chao1指数和香农指数即Shannon指数后发现,TACE前、后指数差异不大,说明肠道菌群多样性均无明显差异（P>0.05）,但是可以发现群落多样性明显减少。根据chao1和Shannon指数和样本不同测序深度指数Observed spieces分别构建稀释性曲线。chao1曲线图显示,样本曲线末端在20000reads-50000reads水平时趋于平坦,证明测序工作足够代表已捕获样品中的多样性。香农多样性曲线图显示,所有样本曲线在50000Reads水平时均进入平台期,说明在现有测序深度数据量合理足以覆盖样本内90%以上的细菌。3.构建PCoA分析分析前三类主要成分差异,结果发现TACE前、后样本存在距离差异,但也存在一部分主成分相似,需要进一步区分。将物种组成信息按照样品及物种之间的距离进行聚类,考察样品物种的聚集程度及丰度差异,结果发现TACE前、后患者肠道菌群大部分种类相同,但也发生了细菌种类及数量的变化。4.根据HCC患者粪便样品测序结果绘制“门、属”等级的柱状图,结果共检测出13种菌门,143种菌属。各样本在门水平的微生物丰度组成结构主要以拟杆菌门50.1%、厚壁菌门29.7%、变形菌门12.4%、放线菌门1.6%四种优势菌门构成,四种优势菌门占所有物种总量93.8%。5.根据HCC患者样品测序所获得的OTU所代表的物种,在“门”、“属”分类等级分别对TACE前、TACE后统计做饼状图,直观查看不同分类等级TACE前、后物种的比例差异。结果TACE前检测到12种菌门,TACE后检测到10种菌门,HCC患者TACE后,变形菌门平均丰度升高（16.44%-23.66%）,拟杆菌门、厚壁菌门平及放线菌门平均丰度降低（49.75%-49.36%、29.7%-20.49%、0.50%-0.25%）。属水平TACE前共检测到120种细菌,TACE后共检测到103种细菌,TACE后丰度减低的菌属除了萨特氏菌属以外,都属于拟杆菌门及厚壁菌门等肠道益生菌,而肠杆菌科、副杆菌属、克雷伯氏菌属等致病菌及条件致病菌在TACE后丰度明显升高。结论:1.肝细胞癌患者TACE治疗前后,肠道菌菌多样性减少。2.肝细胞癌患者TACE后,放线菌门、厚壁菌门、拟杆菌门相对丰度降低,而变形菌门相对丰度升高。3.肝细胞癌患者TACE后,肠道菌群中拟杆菌、毛螺菌属、粪杆菌属等益生菌减少,肠杆菌科、副杆菌属、克雷伯氏菌属及梭杆菌属等致病菌及条件致病菌增多。