【摘 要】
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核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib）de Bary）是使作物产生菌核病的主要病原物,该菌广泛侵染大部分单子叶和双子叶植物,包括大部分的经济作物和油料作物,是需要密切关注并防治
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核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib）de Bary）是使作物产生菌核病的主要病原物,该菌广泛侵染大部分单子叶和双子叶植物,包括大部分的经济作物和油料作物,是需要密切关注并防治的病原菌之一。MADS-box基因家族是一类重要的转录调控因子,广泛存在于真核生物中,MADS-box家族中的SRF亚族具有高度保守的结构域,SsMCM1具有SRF亚族的高度保守结构域,本课题组研究发现SsMCM1参与调控核盘菌的生长发育及致病性。结合酿酒酵母MCM1信号通路分析发现核盘菌中存在与酿酒酵母MCM1下游Cdc28高度同源的蛋白SS1G02296,本研究成功克隆该基因,命名为SsCdc28,并通过以下研究初步分析SsCdc28蛋白的功能。1、以野生型核盘菌UF-1DNA为模板成功克隆得到SsCdc28基因,全长1185bp,并对SsCdc28进行生物信息学分析。2、本研究通过NCBI查找SsCdc28基因上下游序列,设计特异性引物,以野生型核盘菌DNA为模板克隆SsCdc28基因上游1246bp片段,下游1225bp片段,将上下游片段与敲除载体pXEH连接,构建核盘菌SsCdc28基因敲除载体pXEH-Cdc28。3、制备核盘菌原生质体,将构建好的敲除载体pXEH-Cdc28转化到原生质体中。通过PCR扩增验证经抗性筛选的转化子,最终得到3个阳性SsCdc28敲除突变体SsCdc28-7、SsCdc28-11、SsCdc28-13。4、对筛选得到的敲除突变体菌株和野生型核盘菌进行对比,结果表明敲除转化子的菌丝生长速率变慢,无法形成菌核,菌丝弯曲,分枝角度变大,侵染垫及草酸的产生量显著减少,抵抗高渗透胁迫环境能力增强,致病力减弱。上述研究表明SsCdc28参与调控核盘菌生长发育以及草酸等物质的产生,进而影响核盘菌的生长发育及致病力,为进一步揭示核盘菌转录因子SsMCM1调控网络,探索核盘菌生长发育及致病机制奠定基础。
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