论文部分内容阅读
目的:本文颠覆性的将研发焦点从传统肿瘤化疗药物转移到肿瘤转移的预防药物,也许可以为当前肿瘤治疗带来革命性的突破。近期大量流行病学研究表明,长期服用口服避孕药物可以显著减少患肿瘤的风险,受此启发,我们假设传统用于避孕、流产的中药具有预防肿瘤转移的性质。为了验证这个假设,我们选择了安全面又广为人知的堕胎中药牛膝,同时通过生物活性引导的一系列提取分离步骤,从其根部分离、筛选、纯化到了皂苷化合物A(人参皂苷Ro)。方法:牛膝根部,经过80%乙醇回流提取,液相萃取和大孔树脂D101初步分离,通过高效液相半制备的方法得到2个皂苷类化合物,和3个甾酮类化合物,并通过质谱检测和核磁对其结构进行鉴定。通过构建的孕卵模型高通量筛选试验,对比了五种化合物的抗着床活性。在本文中,采用了 MTT实验,细胞凋亡,transwell实验,细胞粘附以及裸鼠肺转移模型来探究化合物A(人参皂苷Ro)的抑制人体结肠癌细胞HT29转移的特性。随后,基于胚胎着床和肿瘤转移机制方面的共通性,对人参皂苷Ro作用的分子机理进行了研究探讨。结果:通过孕卵模型高通量筛选试验,我们确定了人参皂苷Ro具有较高的抗着床活性。结合MTT实验,检测到细胞存活抑制率呈浓度依赖性,但没有显著性差异。凋亡实验结果显示,人参皂苷Ro并未引起HT29细胞显著性凋亡。在100μg/ml人参皂苷Ro作用下,HT29细胞粘附,迁移,侵袭能力受到显著抑制。人参皂苷Ro可以剂量依赖性的下调整合素αvβ6的表达量。同时运用Western-blot和RT-PCR实验检测了与侵袭实验相关的基质金属蛋白酶(MMP-9和-2),以及p-ERK的蛋白表达量和相关mRNA的表达量,其皆在人参皂苷Ro作用下受到抑制。在体内药效评价方面,构建了裸鼠肺转移模型,肺部肿瘤转移节点数受人参皂苷Ro剂量依赖性下调,这也在肺部切片H&E染色结果中再次印证。同时,人参皂苷Ro抑制整合素avβ36表达的效果也在免疫组化实验中得到证实。结论:从避孕中草药牛膝中提取分离的人参皂苷Ro通过影响整合素αvβ6与ERK相关通路来调节HT29细胞的转移性质,同时未表现出明显的细胞毒性,这符合预防肿瘤转移药物的一般特性。同时,人参皂苷Ro对该信号通路中相关蛋白和mRNA表达的影响,最终抑制了 HT29在裸鼠体内的肺转移,表明人参皂苷Ro具有成为治疗肿瘤转移此种微小残留病症(MRD)的潜力。此类颠覆性的研究也为开发传统避孕药物转为肿瘤转移预防药物提供了一定的策略。