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目的：造血微环境(hematopoietic microenvironment，HME)是支持和调节造血细胞定居、增殖、分化、发育和成熟的内环境。骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)是造血微环境的重要组成部分，其损伤可导致造血微环境损害，影响移植后骨髓造血重建的过程。促进BMSCs功能恢复，是修复HME的重要途径。研究发现，维甲酸(retinoic acid，RA)，尤其是全反式维甲酸(all-trans retinoic acid，atRA)可以通过影响靶基因的表达调控BMSCs粘附、迁移功能，提示RA相关基因在BMSCs功能调控中可能起重要作用。JWA基因是新近发现的一种受维甲酸诱导表达增高的细胞骨架蛋白相关基因，可能参与细胞分化调控、应激反应、氨基酸代谢等众多信号转导过程。研究显示，atRA介导的细胞分化和生长调控作用至少部分是通过JWA基因的表达调控来实现的。因此，JWA基因可能在BMSCs功能调控以及造血微环境重建中起作用。本研究观察了atRA作用下，人BMSCs粘附、迁移等功能变化与JWA基因表达之间的关系，并利用核酶技术，检测JWA基因表达抑制后人BMSCs粘附、迁移功能的变化。以探讨维甲酸相关的JWA基因在人BMSCs粘附、迁移功能调控中的作用。方法：1．分离培养临床27例造血干细胞移植(PBSCT)患者预处理前后BMSCs，检测细胞表面ICAM-1和VCAM-1表达(流式细胞术)、BMSCs培养上清液中可溶性ICAM-1(sICAM-1)水平(放免法)、BMSCs对CD34~+细胞的粘附率，以及不同浓度atRA(0.01μmol／L、0.1μmol／L、1μmol／L)对上述指标的影响。2．分离培养临床骨髓像正常的非恶性血液病患者BMSCs，不同浓度atRA(0.01μmol／L、0.1μmol／L、1μmol／L、10μmol／L)干预24h后，观察细胞超微结构改变，检测细胞内JWA mRNA表达(sqRT-PCR法)、ICAM-1和VCAM-1表达(流式细胞术)、FN和LN表达(免疫细胞化学法)、细胞迁移(改良Boyden小室法)、F-actin表达(激光共聚焦显微镜)，并检测共培养条件下BMSCs细胞对Jurkat细胞的粘附率以及Jurkat细胞生长曲线、倍增时间、细胞周期(流式细胞术)、FAK mRNA表达(sqRT-PCR)、FAK蛋白表达(Western blot法)、VLA-4和LFA-1表达(流式细胞术)。JWA mRNA表达与粘附、迁移指标之间进行相关性分析。3．构建JWA基因特异性锤头型核酶逆转录病毒载体，转染入BMSCs，筛选鉴定后，检测细胞内JWA mRNA表达(sqRT-PCR)。4．检测转染后细胞表面ICAM-1和VCAM-1表达(流式细胞术)、FN和LN表达(免疫细胞化学法)、细胞迁移(改良Boyden小室法)、F-actin和α—tubulin表达(激光共聚焦显微镜)，并检测共培养条件下BMSCs细胞对Jurkat细胞的粘附率以及Jurkat细胞生长曲线、倍增时间、细胞周期(流式细胞术)变化。结果：1．PBSCT预处理后，BMSCs表面ICAM-1、VCAM-1以及培养上清液中sICAM-1水平降低，BMSCs对CD34~+细胞粘附率降低。atRA作用后，BMSCs表面ICAM-1表达增加，培养上清液中sICAM-1水平升高，BMSCs对CD34~+细胞的粘附率增加。2．atRA作用后，BMSCs内质网、线粒体等细胞器易见，可见明显细胞微丝骨架：JWA-mRNA表达以及ICAM-1、VCAM-1、FN、LN、F-actin表达、迁移细胞数均随atRA浓度增高而增加；BMSCs对Jurkat细胞的粘附率显著增高，Jurkat细胞FAK mRNA、FAK蛋白及VLA-4、LFA-1表达上调、增殖增强。相关性分析显示，细胞内JWA mRNA表达量与atRA浓度及ICAM-1、VCAM-1、LN表达量、细胞粘附率、迁移细胞数呈显著正相关。3．JWA核酶逆转录病毒重组载体转染入BMSCs后(B-JWARZ组)，JWA mRNA表达量显著低于未转染细胞(BMSCs组)和空载体转染细胞(B-pLXSN组)。4．与B-pLXSN组及BMSCs组比较，B-JWARZ组细胞ICAM-1、VCAM-1、FN、LN表达、迁移细胞数显著降低，F-actin及α-tubulin表达降低，对Jurkat细胞的粘附率降低，共培养的Jurkat细胞增殖减慢。结论：1．atRA可能通过上调BMSCs粘附分子表达，部分修复外周血造血干细胞移植患者受损BMSCs的粘附功能。2．atRA可能通过上调JWA基因的表达调控BMSCs功能。3．JWA基因及其表达产物可能参与BMSCs粘附分子表达、细胞形态维持及细胞迁移功能的调控。本研究为探讨BMSCs功能的基因调控机制提供了一个新的思路，对造血细胞回髓定位、分化增殖调控机制的研究也有帮助，并对进一步阐明JWA基因的功能提供了一定实验依据。增强BMSCs内JWA基因的表达，能否促进BMSCs的粘附、迁移功能，进而促进骨髓造血微环境损伤后修复值得进一步研究。