论文部分内容阅读
第一部分激素联合脂多糖诱导早期兔股骨头坏死的实验研究目的运用组织学技术、CT扫描和显微CT成像观察激素联合脂多糖诱导早期兔股骨头坏死的实验效果。方法健康雄性新西兰大白兔30只,随机分为实验组25只和对照组5只,实验组经耳缘静脉注射10μg/Kg的脂多糖二次,再肌肉注射20 mg/Kg甲泼尼龙三次,对照组注射同等剂量的生理盐水,5周后CT扫描髋关节,随机处死实验组和对照组兔4只,显微CT成像扫描股骨近端,并作组织切片观察。结果CT扫描显示实验组兔股骨头不同程度的骨密度不均匀,显微CT成像显示骨质疏松,软骨下骨囊性化,周围见硬化骨,组织学切片见骨细胞陷窝空疏,脂肪细胞增多,部分血管栓塞。结论激素联合脂多糖能够安全便捷地诱导兔早期股骨头坏死模型。第二部分VEGF基因转染MSCs结合PLA/HA复合多孔支架的异位成骨研究目的观察pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)结合聚乳酸/纳米羟基磷灰石复合多孔支架的异位成骨效果。方法实验分为3组：(1)VEGF转染MSCs复合材料组,(2)空白载体转染MSCs复合材料组,(3)单纯支架组。分离大鼠骨髓间充质干细胞,诱导成骨条件培养,基因转染后RT-PCR和Western blot方法检测VEGF的表达,细胞与材料复合后扫描电镜观察。将复合细胞的支架材料植入大鼠肌袋后第2,4,8周进行X线和组织学检测。结果成功分离出大鼠骨髓基质干细胞,并诱导成骨方向培养,RT-PCR和Western blot显示转染后MSCs的VEGF表达水平明显高于其他2组,聚乳酸/纳米羟基磷灰石复合多孔支架呈三维多孔隙结构,细胞能有效生长,植入大鼠体内后,转染组4周可见异位成骨,8周更加明显,另2组未见明显成骨。结论VEGF基因转染大鼠MSCs复合PLA/HA多孔支架能在大鼠体内诱导成骨。第三部分VEGF基因转染MSCs结合PLA/HA复合多孔支架治疗兔早期股骨头坏死目的探讨利用pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染兔MSCs与PLA/HA多孔支架复合后植入股骨头坏死模型兔的股骨头内,观察其成血管和成骨能力。方法分离、培养兔骨髓基质干细胞,pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染兔MSCs后RT-PCR检测VEGF表达情况,将转染后的兔MSCs与PLA/HA多孔支架复合。实验分为四组：(1)pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染MSCs复合支架组,(2)空白载体转染MSCs复合支架组,(3)单纯支架植入组,(4)未处理组。经兔股骨大转子后下方向股骨头钻直径3mm工作隧道,植入支架材料。术后分别于8、12周对股骨头行显微CT及组织病理学切片检查,第12周行X线摄影。结果成功分离培养出兔MSCs, pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染后,VEGF表达水平明显高于其他组。pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染MSCs支架植入股骨头后8周可见坏死骨小梁周围部分新骨形成,支架周围成纤维细胞、淋巴细胞浸润,小血管形成,12周见新生骨小梁生成,支架吸收,而其他组未见明显新生骨。显微CT显示重组质粒转染组股骨头形态正常,骨小梁分布均匀,其他组部分股骨头变形,软骨下骨变薄,骨小梁稀疏、断裂。X线显示重组质粒转染组股骨头形态正常、密度均匀,未治疗组股骨头明显变形,骨密度不均匀。结论pcDNA3.1-VEGF165重组质粒转染兔MSCs复合PLA/HA多孔支架能够诱导兔股骨头内新生血管和骨的形成,是一种较好的修复股骨头坏死的方法。