【摘 要】
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目的:探讨冬凌草甲素（Oridonin,ORI）对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（Human Kel oid Fibroblasts,HKF）的增殖、迁移、侵袭的作用以及对细胞外基质（Extracellul armatrix,ECM）形成与沉积相关的蛋白表达的影响,并分析其影响机制。方法:对购自广州华拓生物科技有限公司的人瘢痕疙瘩成纤维原代细胞进行复苏、传代、冻存等体外细胞培养。取处在对数生长期的第3-7代
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目的:探讨冬凌草甲素（Oridonin,ORI）对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（Human Kel oid Fibroblasts,HKF）的增殖、迁移、侵袭的作用以及对细胞外基质（Extracellul armatrix,ECM）形成与沉积相关的蛋白表达的影响,并分析其影响机制。方法:对购自广州华拓生物科技有限公司的人瘢痕疙瘩成纤维原代细胞进行复苏、传代、冻存等体外细胞培养。取处在对数生长期的第3-7代细胞进行本实验研究。将HKF设为对照组,HKF+ORI设为实验组:（1）采用CCK-8增殖实验检测不同浓度的ORI实验组（10.0,12.5,15.0,17.5,20.0μM）在不同作用时间（24,48,72h）下对HKF增殖能力的影响,并测得ORI作用于HKF的半数抑制浓度（IC50）,筛选出适宜的药物作用浓度用于后续实验。（2）细胞划痕实验检测ORI对HKF迁移能力的影响。（3）细胞Transwell侵袭实验检测ORI对HKF侵袭能力的影响。（4）实时定量逆转录聚合酶链式反应（Real-time Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）和蛋白免疫印迹实验（Western blot）检测ORI对HKF的ECM相关蛋白如纤连蛋白1（Fibronectin1,FN1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原（Collagen typeⅠ,COLⅠ）、Ⅲ型胶原（Collagen typeⅢ,COLⅢ）等表达的影响。另外将实验分为对照组（HKF）、模型组（HKF+TGF-β1）、实验组（HKF+TGF-β1+ORI）,用RT-PCR和Western blot实验检测ORI对HKF内TGF-β1诱导的核苷酸结合寡聚化结构域（NOD）样受体蛋白-3（Nod-like Receptor Protein-3,NLRP3）、含有胱天蛋白酶募集域的凋亡相关斑点样蛋白（Apoptosis-associated Speck-like Protein containing a C-terminal caspase-recruitment domain,ASC）、Smad2、Smad3及其磷酸化（p-Smad 2,p-Smad 3）等表达的影响。结果:（1）CCK-8实验结果显示,与对照组相比,ORI实验组对HKF的增殖具有抑制作用,且随着药物浓度增加,抑制作用越来越显著,呈剂量依赖性（P＜0.05或P＜0.01）。每个相同浓度ORI在不同作用时间（24,48,72h）下,对HKF增殖的抑制作用无显著区别,差异不具有统计学意义（P＞0.05）。测得药物作用24,48,72h时的IC50分别为15.64,15.65,15.70μM。（2）与对照组相比,实验组细胞24h迁移能力显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。（3）与对照组相比,实验组细胞24h侵袭能力显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。（4）与对照组相比,实验组FN1,α-SMA,COLⅠ,COLⅢ表达水平明显下调（P＜0.05）（5）与对照组相比,模型组NLRP3,ASC,Smad2,Smad3及p-Smad2,p-Smad3表达水平明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,实验组NLRP3,ASC,Smad2,Smad3及p-Smad2,p-Smad3表达水平明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:ORI抑制了HKF增殖、迁移、侵袭能力及ECM的形成或沉积;ORI通过抑制TGF-β1/Smad信号通路使HKF形成ECM减少;ORI对HKF的影响可能是通过抑制NLRP3的作用而达到的。
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