论文部分内容阅读
目的:在成功构建猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗的基础上,将猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗口服灌胃免疫仔猪,观察其诱导免疫应答的动态变化和对猪带绦虫卵攻击的保护力及其免疫机制,为猪囊尾蚴病的防治提供一种有价值的疫苗。 方法:为了观察其诱导免疫应答的动态变化,将40日龄健康仔猪随机分为4组,每组4头。第1组为1011CFU猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗灌胃组;第2组为1011CFU猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗灌胃组;第3组为1011CFU猪带绦虫重组Bb-TSOL18疫苗灌胃组;第4组为双歧杆菌液体培养基(MRS)对照组。间隔两周免疫1次,共免疫次。采用ELISA法检测各组仔猪免疫后0、2、4、6、8周血清抗体IgG、IgG1、IgG2a水平和外周血淋巴细胞(PBMC)培养上清液IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平;采用MTT比色法检测 PBMC增殖水平;采用流式细胞术(FCM)检测PBMC中CD4+和CD8+T细胞亚群。 为了研究猪带绦虫卵攻击后诱导的保护力及其免疫机制,将40日龄健康仔猪随机分为5组,每组4头。第1组为1011CFU猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗灌胃组;第2组为1011CFU猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗灌胃组;第3组为1011CFU猪带绦虫重组Bb-TSOL18疫苗灌胃组;第4组为空载体对照组;第5组为MRS对照组。间隔两周免疫1次,共免疫2次。于疫苗末次免疫后4周,用猪带绦虫活虫卵给每头仔猪灌胃进行攻击感染,攻击感染3月后,解剖猪体,摘取囊尾蚴,计算减蚴率;采用ELISA法检测各组仔猪血清抗体IgG、IgG1、IgG2a水平和PBMC培养上清液IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-10水平;采用MTT比色法检测PBMC增殖水平。 结果:动态观察发现猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪后,血清抗体IgG、IgG1、IgG2a水平分别在免疫后2~8周、2~8周、2~8周升高,分别在免疫后4周、6周、4周达较高水平;PBMC增殖水平在免疫后2~8周升高,在免疫后6周达较高水平;PBMC中CD4+和CD8+细胞亚群分别在免疫后2~8周和2~8周升高,分别在免疫后8周和6周达较高水平;PBMC培养上清液中 IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平分别在免疫后2~6周、2~8周、4~6周和2~8周升高,分别在免疫后4周、6周、4周和8周达较高水平。其免疫应答水平,猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗组优于重组Bb-TSO45W-4B疫苗组和重组Bb-TSOL18疫苗组。 进一步用猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪,猪带绦虫卵攻击后发现,免疫仔猪获得83.09%的保护力;血清IgG和IgG2a水平升高,IgG1水平降低;PBMC增殖水平升高;PBMC培养上清液中IL-2和IFN-γ水平升高,IL-4和IL-10水平降低。其免疫保护效果,猪带绦虫重组 Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗组优于重组Bb-TSO45W-4B疫苗组和重组Bb-TSOL18疫苗组。 结论:动态观察表明,猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪后,可诱导仔猪产生有效的免疫应答。攻击试验表明,猪带绦虫重组 Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗能够诱导仔猪产生一定的保护力,Th1型免疫应答在其诱导的保护性免疫机制中起重要作用。其免疫保护性,猪带绦虫重组 Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗组优于重组Bb-TSO45W-4B疫苗组和重组Bb-TSOL18疫苗组。