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近年来，许多研究发现热休克蛋白gp96在先天免疫和获得性免疫中发挥重要作用，是诱导Th1型细胞反应的分子佐剂。乙肝病毒(HBV)是严重威胁人类健康的传染性病毒，至今没有被批准的治疗性疫苗问世。HBV治疗性疫苗的研究已取得一些进展，DNA疫苗是其中具有优势和潜力的。但是临床实验显示DNA疫苗的免疫效果普遍较弱，因此探索增强DNA疫苗效果的策略成为当前治疗性疫苗研究的热点。以前的研究表明gp96的N端片段具有肽结合能力和佐剂活性。在此，研究了gp96的N端片段对HBV DNA疫苗免疫效果的作用。
将编码gp96N端的355个氨基酸序列与HBV的结构蛋白(包括膜蛋白S和S2S以及截短的核心抗原HBcAg1-149aa)构建融合基因。利用构建的DNA克隆免疫BALB/c鼠和HLA-A2转基因鼠，采用ELISPOT，四聚体技术和胞内细胞因子染色等方法分析诱生的细胞免疫反应，采用IgG抗体分型的方法检测体液免疫反应。发现相对于单独的抗原免疫，融合基因将HBV特异的CTL反应提高2—6倍。当用含HBV膜抗原的融合基因免疫时，抗体水平下降约10倍。有意思的是，将膜抗原基因与编码N355的质粒共免疫时，抗体水平不受影响。截短的核心抗原与N355构建的融合基因可以将抗体水平提高约20倍。肌肉注射免疫后，产生的抗体主要是IgG2a。N355有助于诱生Th1型细胞反应。当N355连接在抗原S2S的N端时，融合基因诱导CTL反应的能力反而下降。研究表明，gp96的N端片段可以作为分子佐剂增强DNA疫苗的免疫效果。