2019年12月,由新出现的冠状病毒（2019-n Co V）引起的严重的呼吸系统疾病迅速在全世界范围内迅速传播。世界卫生组织（WHO）将这种新型的严重的急性呼吸道疾病命名为:“2019冠状病毒病（coronavirus disease-2019,COVID-19）”,国际病毒分类委员会（International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV）将新型冠状病毒的正式分类名命为严重急性呼吸综合征冠状病毒2（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-Co V-2）。在国内也被称为:“新型冠状病毒肺炎”。引起这种疾病的病原体就是新型冠状病毒（SARS-Co V-2）。在分类上它属于β冠状病毒属,同一属的其他两个病毒:“非典（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus,SARS）”和“中东呼吸综合征（Middle East Respiratory Syndrome,MERS）”也曾在世界上引起了严重的危害。新型冠状病毒（SARS-Co V-2）简称:新冠病毒,是一种具有包膜的单股正链的RNA病毒,病毒基因组全长约29.9kb,含有14个开放阅读框（open reading frame,ORF）编码多种蛋白,包括16个非结构蛋白（nonstructural protein,nsp1-nsp16）,形成复制-转录酶复合物参与病毒的多种生命活动。4种结构蛋白:刺突蛋白（spike,S）,包膜蛋白（envelope,E）,膜蛋白（membrane,M）和核衣壳蛋白（nucleocapsid,N）参与病毒的组装和作为病毒的主要结构成分。核衣壳蛋白（nucleocapsid,N）是新型冠状病毒（SARS-Co V-2）最主要的结构蛋白之一,主要功能有:与病毒遗传物质结合形成核糖核蛋白复合物（ribonucleoprotein complex,RNP）,协助病毒完成病毒颗粒的包装;在病毒的感染宿主过程中调节病毒基因组的转录;及作为主要结构蛋白保证病毒完整性。因此本课题以新型冠状病毒核衣壳蛋白（nucleocapsid,N）作为主要的研究对象,通过研究SARS-Co V-2 Np在宿主细胞中的作用,以及Np在新型冠状病毒感染细胞过程中发挥功能进行初步研究。在此项研究中,首先,通过收集不同时间点新型冠状病毒感染宿主细胞（H1299,人非小细胞肺癌细胞）实验,确定了新型冠状病毒感染宿主细胞的时间和空间表达特征。其次,通过成功构建的SARS-Co V-2 Np的原核表达质粒的产物与宿主细胞裂解液进行GST pull-down实验,实验结果经过质谱分析,发现有多种相互作用的宿主蛋白与SARS-Co V-2 Np发生作用。进一步在宿主细胞中过表达新型冠状病毒N蛋白真核表达质粒,检测过表达N蛋白后宿主细胞中转录组和蛋白组中变化宿主因子,通过GO和KEGG分析转录组和蛋白质组的数据,在蛋白质组数据中筛出两个高表达蛋白:轴突蛋白3（Neurexin-3,NRXN3）和髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白（Myelin-associated oligodendrocyte basic protein,MOBP）。后续分别通过过表达或敲降NRXN3处理细胞,q PCR检测到病毒载量与对照组相比基本没有变化。在敲降MOBP细胞系中病毒载量对比对照组有上升趋势,而过表达MOBP细胞系中的病毒载量与对照组相比却略有下降。分析单一的新型冠状病毒核衣壳蛋白在宿主细胞中过表达引可能起宿主蛋白的表达量波动,而在过表达和敲降宿主因子的细胞系中病毒载量的变化可能由多种病毒蛋白和宿主因子共同决定,而机制暂未可知。本研究从分子病毒学和细胞生物学角度,研究新型冠状病毒N蛋白在宿主细胞H1299中的功能,为研究新型冠状病毒N蛋白在新型冠状病毒生命周期中的功能和作用机制提供了实验数据和一定参考。进一步研究病毒的复制与宿主细胞的关系,为病毒的有效的防治提供了可能。