【摘 要】
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目的:骨肉瘤（OS）是起源于间叶组织的恶性肿瘤,在儿童和青少年时期发生率较高。骨肉瘤具有预后差、死亡率高的特点,易发生远处转移,发生远处转移患者的预后较差。因此探索新的与骨肉瘤发生、发展以及远处转移有关的分子和通路具有重要的意义。本文拟探讨富含脯氨酸蛋白11（PRR11）在骨肉瘤组织中的表达情况和其对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡以及上皮间充质转化（EMT）和Wnt/β-catenin信号通路的
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目的:骨肉瘤（OS）是起源于间叶组织的恶性肿瘤,在儿童和青少年时期发生率较高。骨肉瘤具有预后差、死亡率高的特点,易发生远处转移,发生远处转移患者的预后较差。因此探索新的与骨肉瘤发生、发展以及远处转移有关的分子和通路具有重要的意义。本文拟探讨富含脯氨酸蛋白11（PRR11）在骨肉瘤组织中的表达情况和其对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡以及上皮间充质转化（EMT）和Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:免疫组织化学染色法、qRT-PCR和Western Blot检测PRR11在骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞（SAOS2、MG63、U2OS、hFOB1.19）中的表达水平。选取PRR11高表达的U2OS细胞系用于后续实验研究,使用si RNA下调U2OS细胞中PRR11的表达;分别使用CCK8法、Transwell实验、划痕实验来检测U2OS细胞的增殖、侵袭和迁移能力,然后流式细胞仪检测U2OS细胞凋亡水平。蛋白应印迹法检测U2OS细胞中Wnt/β-catenin通路相关蛋白和上皮-间质转化（EMT）标志物的表达水平。结果:（1）人骨肉瘤蜡块组织免疫组化结果显示:在骨肉瘤组织中,PRR11的表达水平是明显高于癌旁组织。（2）qRT-PCR和Western Blot结果显示PRR11在三种骨肉瘤细胞系（SAOS2、MG63、U2OS）和人成骨细胞hFOB1.19中均有表达,在三种骨肉瘤细胞系中,U2OS细胞中的PRR11表达水平最高。（3）CCK-8结果显示下调PRR11后,会抑制U2OS细胞的增殖能力;Transwell实验结果显示下调PRR11的表达水平后,会抑制U2OS细胞的侵袭能力;划痕实验结果显示下调PRR11后,会抑制U2OS细胞的迁移能力;流式细胞术结果显示下调PRR11后,会增加U2OS细胞的凋亡水平。（4）Western Blot结果显示下调PRR11后U2OS细胞中Wnt通路相关蛋白β-catenin、p-GSK-3β的表达水平降低,p-β-catenin、GSK-3β的表达水平增加,同时Wnt通路下游基因Cyclin D1、c-Myc的表达水平也明显降低。EMT相关蛋白中的上皮标志物E-cadherin明显升高,间质标志物Vimentin和Fibronection表达水平明显降低。结论:PRR11在骨肉瘤组织中高表达,PRR11参与调控了骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡等恶性生物学行为;下调PRR11表达能够抑制Wnt/β-catenin信号通路和阻止骨肉瘤细胞发生EMT。这些研究数据表明了PRR11作为一个原癌基因可能参与了骨肉瘤的发生发展,PRR11可能成为骨肉瘤一种潜在的治疗靶标。但是PRR11抑制Wnt/β-catenin信号通路和阻止骨肉瘤细胞发生EMT的具体机制还需后续进一步研究。
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