血管新生是指已存在的血管以出芽的方式生成新的毛细血管的过程。它可发生在许多生理、病理过程中，如伤口愈合、胚胎发生、肥胖、糖尿病性视网膜病变及肿瘤发生等过程中。尤其与肿瘤的生长和迁移密切相关。研究表明，肿瘤生长初期并不伴有新血管生成，但当肿瘤生长至直径为1－2mm后，其体积的继续增长必须靠新血管生成来维持。因此，抑制肿瘤血管新生可延缓肿瘤的生长和扩散。 近来研究表明，以化学固定的异基因型新生血管内皮细胞为疫苗对肿瘤鼠进行预防和治疗，可取得一定的抗肿瘤血管新生效应，体液免疫被认为介导了这一过程。本研究以活的人脐静脉血管内皮细胞 （HUVEC） 为疫苗对肿瘤鼠进行预防和治疗，结果显示，特异性细胞免疫与体液免疫均参与了活 HUVEC 细胞疫苗诱导的抗肿瘤血管新生过程。 我们通过胶原酶消化法从新鲜脐带中获取人脐静脉血管内皮细胞。以1×10<’6>活 HUVECs 细胞对 C57BL／6 小鼠和 BALB／c 小鼠进行预防接种，腹腔注射，每周一次，连续四周。末次免疫后一周，分别于皮下注射 C57BL／6 小鼠肺腺癌细胞（LLC） 及 BALB／c 小鼠骨髓瘤细胞 （FO），监测小鼠肿瘤生长速度及生存时间。结果显示，HUVECs 预防组小鼠与对照组 （PBS） 小鼠相比，肿瘤生长速度明显延缓，小鼠生存期延长。提示，活的人脐静脉血管内皮细胞疫苗能诱导保护性抗肿瘤免疫。 为了探讨活 HUVECs 细胞疫苗诱导保护性抗肿瘤免疫效应的作用机制，我们给 BALB／c 种系小鼠分别接种小鼠骨髓瘤细胞 （FO） 及人肺腺癌细胞 （SPC-A-I）建立肿瘤模型。当肿瘤明显可见时，将小鼠随机分成治疗组和对照组 （PBS）。以 HUVEC 免疫小鼠中获得的活性T细胞或免疫血清对肿瘤鼠进行治疗。结果显示，治疗组小鼠较对照组小鼠肿瘤生长速度显著延缓。病理切片显示，对照组小鼠肿瘤细胞生长旺盛，未见明显的出血、坏死及炎性浸润。而治疗组小鼠肿瘤细胞大面积坏死，并伴明显的出血、坏死及炎性浸润。结果提示，HUVEC 免疫小鼠免疫活性T细胞或免疫血清可以选择性作用于血管内皮细胞，导致肿瘤血管内皮受损，从而使相应区域的肿瘤组织因缺血缺氧而发生坏死。免疫组织 化学分析表明，HUVEC免疫小鼠的免疫血清可以与小鼠肿瘤血管内皮特异性结合，但不与小鼠正常血管内皮结合。体外实验证实，免疫血清可特异性抑制HLJVEC细胞的增殖，但在同样条件下，对肿瘤细胞SPC-A-1的增殖不具有抑制效应。免疫活性T细胞在体外被HUVEC细胞重新激活后，与HUVEC细胞按5：1，10：1，20：1，40：1，80：1的效靶比例共孵育，72小时后，测定上清中乳酸脱氢酶（LDH）的含量。结果表明，HUVEC细胞诱导的CTL与HUVEC细胞呈效靶依赖性，在80:1时可特异性杀伤HUVEC细胞（免疫组，44±8％，对照组19±12％，P<0.05），但同样条件下，对肿瘤细胞F0（免疫组，8.3±1.1％，对照组8.7±0.9％，）不具有杀伤效应。上述结果提示，特异性细胞免疫与体液免疫均参与了活HUVECs细胞疫苗诱导的抗肿瘤血管新生过程。 我们通过测定细胞因子的分泌评估非特异性细胞免疫在活的HUVECs细胞诱导的抗肿瘤血管新生过程中的作用。免疫活性T细胞在体外被HUVEC细胞重新激活，72小时后，检测上清中细胞因子IL-4和工FN-γ的含量。结果表明，IL-4和工FN-γ的含量分别为493.5pg/ml和257.2pg/ml：与对照组30.2pg/ml和32.5 pg/ml相比，均显著升高（P<0.05）。HUVEC免疫小鼠的免疫血清中IL-4和IFN-γ的含量分别为152.5pg/ml和125.2pg/ml；与对照组30.3pg/ml和28.2 pg/ml相比，均显著升高（P<0.05）。上述结果提示：Th1和Th2淋巴细胞均参与了活HUVECs细胞诱导抗肿瘤血管新生过程。 本研究证实了新鲜人脐静脉血管内皮细胞活疫苗具有抗肿瘤血管新生作用，并首次发现特异性细胞免疫也参与了异基因型新生血管内皮细胞诱导的抗肿瘤血管新生过程。这一发现为新型抗肿瘤疫苗的开发设计提供了重要的理论依据，对抗肿瘤疫苗的临床应用具有一定的指导意义。 此外，我们应用生物素对恒河猴肺血管床进行标记，标记后的肺组织经匀浆、透析和亲和层析处理后，获得高纯度的猴肺血管内皮膜蛋白。以这些膜蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体，获得3株不同的单克隆抗体TX111，TX112，TX113。Western blot检测显示，这些抗体所对应抗原的分子量分别为70 KD，85 KD和90 KD。这些抗体都能与人肺组织反应，但不与鼠肺组织反应。它们对恒河猴各组织表现出不同的组织特异性。其中TX111对猴肺组织表现出很高的特异性和亲和性。免疫组织化学染色显示，TX111可与猴肺毛细血 管内皮特异性结合。因此，该抗体可能在肺血管靶向治疗中具有潜在的临床应用价值。 在另一研究中，我们以重组的大肠杆菌硫氧还蛋白为免疫原制备了单克隆抗体。ELISA结果表明，该单克隆抗体与TRX具有高度特异性，它与相应抗原TRX的亲和常数为0.39×10<9>M<-1>。该单克隆抗体可以通过夹心ELISA或WesternBlot方法检测TRX融合蛋白。此外，它还可以通过亲和层析法纯化TRX融合蛋白。此单克隆抗体的开发对于TRX融合表达系统的进一步应用具有重要的价值。