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目的 胃癌是危害人类健康的主要癌症之一,癌症发生与基因表达有关的观点已被公认,癌基因表达及抑癌基因功能丧失会导致癌症。P53是抑癌基因,诱导细胞凋亡。MDM2是癌基因,可以和P53结合并抑制其功能,使其失去细胞监控作用。P14ARF是抑癌基因,其阻断由MDM2诱导的P53蛋白降解,还原P53介导的转录激活活性,延长半率期(15-75min),使其恢复细胞监控作用。所以P53在癌基因MDM2和抑癌基因P14的共同相互作用调节下参与细胞周期调控。收集不同病理程度的胃癌标本,检测P14、MDM2在胃癌组织中的基因水平和蛋白表达,进而分析两者与胃癌发生、发展及预后的关系,为临床治疗胃癌提供分子生物学方面的依据。 方法 运用Western免疫印迹杂交及RT-PCR方法检测病理类型不同的胃癌标本中P14、MDM2的蛋白表达及基因扩增。 1.Western免疫印迹杂交:用P14和MDM2特异性抗体检测胃癌组织蛋白提取液中P14和MDM2蛋白表达数量。 2.RT-PCR半定量测定:用TRIzol试剂提取胃癌组织总RNA,反转录合成cDNA第一链,分别扩增P14、MDM2的PCR产物,检测两者mRNA相对含量。 3.统计分析:采用卡方检验判断统计结果,P值小于0.05具有统计学意义的显著性。 结 果 1.Western免疫印迹杂交结果: MDMZ蛋白在正常胃组织和胃癌组织中均有表达,在胃癌中表达高于正常胃组织,两者比较有显著性差异(p<0.05八 MDMZ蛋白的表达与癌组织分化程度有一定关系,高、中分化癌表达阳性率较高,低分化癌表达阳性率较低,但组间无显著性差异(P>0.05)。 P14ARF蛋白在胃癌中表达与正常胃组织比较无显著性差异h>0·05X与癌组织分化程度无关。 人RT-PCR半定量测定结果: 正常胃组织和胃癌组织中均有MDMZ基因扩增,胃癌组织中基因扩增阳性率明显高于正常胃组织,两者比较有显著性差异k<0.05人基因的扩增与癌组织分化程度相关。高、中分化癌呈现出较高的扩增阳性率,在低分化癌中扩增阳性率较低,组间有显著性差异(p<0.05)。 正常胃组织和胃癌组织中均有P14基因扩增。胃癌组织中P14基因扩增阳性率与正常胃组织比较无显著性差异h>0.05人与癌组织分化程度无关。 结 论 1.MDMZ在胃癌中基因扩增和蛋白表达增强,与正常胃组织相比有显著性差异,说明MDMZ与胃癌的发生有相关性。 2.MDMZ基因扩增与胃癌组织的病理分级相关,高、中分化与低分化有显著性差异,说明MDMZ的基因扩增可能与胃癌的恶性程度及预后有关。 ·2· 3.P14ARF的基因扩增与蛋白表达在胃癌组织和正常组织间无差异,与病理分级无关。