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[目的]:建立研究脊髓损伤修复的动物模型,观察骨髓基质干细胞不同的移植方法对脊髓损伤部分的结构和功能的影响、BBB评分和爬网格评分及脊髓灰质前角中的Bcl-2.、Bax的表达。研究骨髓基质干细胞不同的移植方法对Bcl-2、Bax表达变化的影响,探讨骨髓基质干细胞不同的移植方法治疗脊髓损伤的可行性。 [材料与方法]:1、实验动物分组:SD成年雌性大鼠186只,体重240±20克,随机分成31组,每组6只,即(1)空白对照组;(2)脊髓损伤骨髓基质干细胞非移植组(损伤对照组)(再分为6组:术后1天组、3天组、7天组、14天组、21天组和28天组);(3)绿色荧光蛋白转基因小鼠脊髓损伤骨髓基质干细胞移植组:每组又分为4组:直接移植组,静脉移植组,腹腔移植组,蛛网膜下腔移植组(每组再分为6组:1天组、3天组、7天组、14天组、21天组和28天组);2、脊髓挫伤模型制备:用自制改良的Allen装置使不锈钢杆自由落下,造成T12脊髓节段挫裂伤。在移植前、后每天对大鼠进行BBB评分和爬网格试验。不超过4分者为入选标准。手术2天后,行带荧光的骨髓基质干细胞移植。之后,以4%多聚甲醛固定液灌注固定大鼠。取损伤(T12脊髓节段)节段下(包括损伤节段)长约3cm脊髓入4%多聚甲醛后固定,修块,30%sucrose-PBS液沉底,恒冷切片机下制作15-20μm厚的连续冰冻切片,间隔取片后分别以抗Bax,Bcl-2抗体行免疫组化ABC染色。在Olympus荧光显微镜下观察治疗组及对照组,损伤后不同时间段组中Bcl-2,Bax蛋白在SD大鼠脊髓灰质前角神经元的表达分布情况。进行组间多个样本均数比较的单因素方差分析、q检验和组内两样本均数比较的配对t检验。 [结果]:1.各种移植方法在损伤脊髓节段上下均可检测到荧光细胞,但是,不同移植方法在损伤脊髓内荧光MSCs数不同。损伤脊髓节段和非损伤脊髓节段内细胞数也有明显差异(p<0.05)。同时,我们发现,即使直接移植第1天,第3天的细胞数与第7天的相比亦有明显差异(p<0.05)。