目的:利用酵母表面递呈技术,通过人PD-L1蛋白筛选人源单链抗体文库,获得识别人PD-L1蛋白的单链抗体的核苷酸序列。我们选用scFv-mFc融合蛋白的方式,并采用pFuse真核表达载体来表达此scFv-mFc融合蛋白,研究其对人肝癌细胞(HepG2)的亲和力和体内外抑制作用。方法:采用基因工程的方法构建重组质粒pFuse-scFv,通过真核转染至293F(人胚肾上皮细胞),使用无血清Pro 293a-CDM培养72h,收集培养液中分泌的融合蛋白,运用免疫组化检测scFv-mFc融合蛋白与人肝癌细胞(HepG2)的结合;流式细胞术分析融合蛋白和人肝癌细胞的亲和力;ADCC实验测定融合蛋白对人肝癌细胞体外杀伤作用;利用接种人肝癌细胞的荷瘤小鼠对融合蛋白的体内抗肿瘤效应进行研究。结果:通过重组质粒转染至293F细胞的方法,scFv-mFc融合蛋白被分泌到无血清的培养液中;免疫组化和流式细胞术结果示,融合蛋白与表面高表达PD-L1蛋白的人肝癌细胞有较强的结合能力;ADCC实验结果示融合蛋白对肝癌细胞的杀伤作用;荷瘤小鼠实验结果示融合蛋白对肿瘤的生长起到抑制作用,在5mg/Kg的药物剂量下,荷瘤小鼠瘤体体积平均增长率从14.90%降低至3.72%,两独立样本t检验P<0.05,差异具有统计学意义。结论:成功制备了含单链抗体的融合蛋白,其对人肝癌细胞(HepG2)具有良好的结合能力,在动物实验及细胞实验中均证明对肿瘤细胞产生抑制作用,为研制靶向抗肿瘤药物提供实验室基础依据。