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血管生成素样蛋白6因其分子结构和氨基酸序列与血管生成素极为相似而得名。Angpt16可抑制糖异生通路,防止在脂肪肝脏沉积从而调节脂代谢。白藜芦醇是含有芪类结构的天然多酚类化合物,白藜芦醇有抗衰老作用并且在抗癌、抗炎、降低血糖和保护心血管上有一定效果。高剂量(3-5g)的白藜芦醇能提高能量消耗,降低血糖。和厚朴酚为中药厚朴的提取物,也是厚朴中主要的活性物质。和厚朴酚能降低胆固醇,抑制低密度脂蛋白氧化物的产生和防止动脉粥样硬化的形成。黄芩苷是黄芩中的一类黄酮类化合物,黄芩苷有抑菌、利尿、抗炎、抗变态、解痉挛、抗血小板聚集、降血脂等作用。本文根据牛、猪、马的Angpt16基因序列,设计并合成两对特异性引物。从羊肝中提取总RNA,通过分子生物学方法克隆得到Angptl6基因片段,将不同浓度(40μM、20μM和10μM)的白藜芦醇、和厚朴酚和黄芩苷三种药用植物提取物单体加入羊肝原代培养细胞培养基,以Angptl6基因为靶点,通过荧光定量PCR法测定Angpt16 mRNA的表达。从基因的角度初步探讨三种提取物对与代谢有关基因的调节作用。结果如下：1、提取的羊肝总RNA纯度好,结构完整,扩增出的特异性片段大小和预期吻合,测序结果提交Genbank,为荧光定量试验打下基础。用DNAsis软件进行同源性分析发现,与人、牛、野猪、狗和熊猫的序列同源性依次为86%、97%、94%、93%、89%,对今后研究Angpt16基因有指导意义；2、采用胶原酶双灌注法分离羊肝细胞总量为(2.065±0.485)×108个(nn=4)产率为1.032x107个/克肝组织。用0.4%台盼蓝染色试验所得到的羊肝细胞即时存活率为(86.42±2.57%)。肝细胞形态结构完整,活力好。细胞上清液中,前五天LDH含量高,高达87U/L,羊肝细胞经过自我修复,第五天后,LDH浓度逐渐降低恢复平稳,约至51U/L,说明此时细胞生长状态良好,细胞膜完整性好。上清液中BUN浓度一直维持稳定。培养的细胞可维持良好的尿素氮合成。ALB浓度在前五天一直上升,此时细胞白蛋白分泌增加。第六天开始下降,然后趋于平稳,肝细胞内白蛋白的合成也逐渐稳定。组织块培养法与灌注法相比,操作简单,但成功率较低,细胞生长速度较慢,前期培养时血细胞等组织碎片较多。3、荧光定量PCR熔解曲线为单一峰。白藜芦醇40gM和20μM组的Angpt16 mRNA水平显著高于正常组(P<0.05),白藜芦醇10μM组Angpt16 mRNA水平与正常组差异不显著(P>0.05)。和厚朴酚10μM、20μM和40μM三个剂量组的Angpt16 mRNA水平极显著高于正常组(P<0.01)。黄芩苷10μM、20μM和40μM三个剂量组的Angpt16 mRNA水平极显著高于正常组(P<0.01)。