天然橡胶是我国四大工业原料之一,巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)是天然橡胶的主要来源。但由于其生长区域受限、单株产量低及病虫害引起的减产等因素影响,导致我国天然橡胶自给率低。橡胶白粉病是橡胶树两大主要病害之一,该病菌侵染幼芽、幼枝和幼叶,对橡胶产量和品质造成巨大影响。目前橡胶白粉病的防治主要采用化学农药喷洒的方法,导致对自然环境的严重污染。抗病育种是一个可行的方向。miRNA是生物体内重要的调控基因,在植物抗病、抗逆过程中也发挥了重要作用。本研究试图将橡胶树miRNA与其抗白粉病联系起来,挖掘抗白粉病相关miRNA,这对miRNA的功能研究和橡胶树的抗病育种具有重要意义。本研究以白粉处理的热研7-33-97橡胶树品种为材料,通过miRNA-seq二代测序寻找差异表达的miRNA进行qPCR验证,并挑选其中若干miRNA做进一步的功能验证,最终确定与抗白粉病相关的miRNA;同时初步研究橡胶树18个Ago蛋白基因家族,以期寻找Ago蛋白、miRNA及白粉病三者间的关系。研究结果如下:1、miRNA-seq测序结果:得到1 16305747个高质量reads,844个miRNA与数据库已知植物miRNA相似,预测到1968个新miRNA。2161个miRNA共预测出25880个靶基因。2、miRNA表达载体构建:选取表达差异显著的25个miRNA进行表达载体的构建,包括三类载体(pGEM-T、pUC19、pCAMBIA1300),其中pGEM-T载体用于克隆及测序验证,pUC19载体可进行瞬时表达研究(如拟南芥、橡胶树原生质体转染),pCAMBIA1300载体进行转基因植物的构建。克隆片段选择包含pri-miRNA序列的上下游约500bp的片段。目前该工作已接近完成。利用拟南芥原生质体瞬时表达体系发现:hb-miRNA可能参与植物体对胁迫的应答反应。3、Hb-miR398功能研究:综合前期实验结果及文献报道,选取miR398进行功能验证。miR398受白粉侵染的诱导,外源抗病信号分子均能诱导miR398表达,表明miR398可能参与橡胶树对白粉的抗病过程;miR398有助于增强植株的抗病性、耐旱性;hb-Resl/5/6被初步证实是miR398的靶基因。4、橡胶树Ago蛋白基因家族研究:Ago蛋白是miRISC复合物中的重要蛋白。橡胶树有18个Ago蛋白基因家族成员,根据结构可分为3类;这些Ago蛋白在不同叶龄及白粉处理后,表达情况各异,说明Ago蛋白可能参与橡胶树的生长、抗病、抗逆过程,并且不同的Ago蛋白功能不同。