试验一草鱼unc45b基因的全长克隆、生物信息学分析及组织差异表达UNC45b(unc-45 myosin chaperone b)是肌球蛋白的分子伴侣,在肌纤维形成过程中调控肌球蛋白(粗肌丝)的折叠、组装和积累,对维持肌节稳定和肌肉发育起着重要作用。本实验采用c DNA末端快速扩增法首次克隆获得草鱼unc45b基因全长序列,对其编码蛋白质序列的特性进行预测和分析,并采用实时荧光定量PCR法检测草鱼各组织unc45b基因的差异表达。结果表明,草鱼unc45b基因全长3163bp,含60 bp的5’端非编码区、298 bp的3’端非编码区及长2865 bp编码934个氨基酸的开放阅读框。草鱼unc45b基因编码的氨基酸序列与斑马鱼、斑点叉尾鮰、墨西哥丽脂鲤、尼罗罗非鱼和大西洋鲑unc45b的氨基酸序列同源性分别达92%、86%、86%、82%和81%;生物信息学分析显示草鱼unc45b蛋白分子质量103,699.8Da,理论等电点7.39,为亲水性非分泌蛋白,不含信号肽;其二级、三级结构包括α-螺旋(α-helix)和环(loop)。组织差异表达结果显示unc45b基因在草鱼血液、肝脏、脾脏、肾脏、心脏、脑、前肠、鳃、皮肤和肌肉组织中均有表达,尤其在心脏组织中表达量最高,其次是肌肉组织,均显著高于其他组织(P<0.05);在血液、肝脏、脾脏、肾脏、脑、前肠和鳃中仅极少量表达,所得结果与该基因的功能相一致。试验二脆化草鱼肌节装配相关基因unc45b的时空表达本试验以投饲配合饲料的草鱼为对照组,以干蚕豆浸泡24h后投饲的草鱼为试验组(也称蚕豆组),对两组草鱼进行为期12周的养殖,并分别于0周、4周、8周、12周采集骨骼肌、心肌、皮肤和肝脏组织,采用实时荧光定量法构建各组织unc45b基因m RNA的时空表达谱。结果表明,骨骼肌和心肌组织中unc45b基因随着养殖时间的增加表达量显著降低(P<0.05),12周时表达量最低;而皮肤和肝脏组织中unc45b基因随着养殖时间的增加表达量显著增加(P<0.05),12周时表达量最高,但与骨骼肌和心肌组织相比,皮肤和肝脏组织unc45b基因表达量极低。对脆化草鱼和普通草鱼0周、4周、8周、12周各组织unc45b基因表达量进行同一时期的组间比较分析,蚕豆组草鱼骨骼肌和心肌组织各时期unc45b基因的表达量显著高于对照组(P<0.05);而肝脏和皮肤组织各时期unc45b基因的表达量在两组间无差异(P>0.05)。所得结果表明,蚕豆和养殖周期均对unc45b基因m RNA表达量有一定影响。随养殖时间的延长普通草鱼和脆化草鱼骨骼肌、心肌、皮肤和肝脏unc45b基因m RNA表达量各自均发生了有规律的变化。同时蚕豆明显影响了骨骼肌和心肌组织unc45b基因的表达,所得结果与unc45b基因的肌节装配功能相一致,同时说明蚕豆确实影响了草鱼肉质。