目的:在细胞水平研究DJ-1与胃癌细胞多药耐药的关系,明确DJ-1是否参与了胃癌细胞多药耐药的诱发。方法:1.利用Western Blot与Realtime PCR技术分别检测DJ-1在亲本胃癌细胞SGC7901和长春新碱（VCR）诱导的胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中的蛋白和m RNA表达水平。2.以慢病毒为载体,通过基因转导和基因沉默技术分别构建DJ-1高表达的SGC7901胃癌细胞株与DJ-1低表达的SGC7901/VCR多药耐药胃癌细胞株。利用各自带荧光的阴性对照慢病毒筛选出感染条件,在此条件下:（1）用LV-DJ-1重组慢病毒感染亲本胃癌细胞SGC7901,48 h后加入0.6μg/ml嘌呤霉素加压筛选两周并连续传代10次以上,构建DJ-1高表达的胃癌稳转细胞株SGC7901/LV-DJ-1,储存备用。（2）用LV-DJ-1-RNAi重组慢病毒感染胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR,48 h后加入6μg/ml嘌呤霉素加压筛选两周并连续传代10次以上,构建DJ-1低表达的胃癌耐药稳转细胞株SGC7901/VCR/sh DJ-1,储存备用。随后,利用Western Blot与Realtime PCR技术分别检测稳转株细胞中DJ-1的蛋白和m RNA表达水平,鉴定稳定转染细胞株是否构建成功。3.依次用长春新碱（VCR）、阿霉素（ADR）、5-氟尿嘧啶（5-FU）和顺铂（DDP）四种化疗药物处理SGC7901细胞、SGC7901/LV-DJ-1细胞、SGC7901/VCR/sh DJ-1细胞和SGC7901/VCR细胞,通过检测以下变化,观察DJ-1表达水平与胃癌细胞多药耐药的关系:（1）CCK比色法检测各组细胞存活率和各组细胞对上述四种化疗药物的半抑制浓度(IC₅₀);（2）克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力;（3）流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期变化。4.利用流式细胞仪分别检测SGC7901细胞、SGC7901/LV-DJ-1细胞、SGC7901/VCR/sh DJ-1细胞和SGC7901/VCR细胞对阿霉素的蓄积与滁留以及VCR、ADR、5-FU和DDP四种化疗药物处理后各组细胞的凋亡,以求观察DJ-1表达水平对胃癌多药耐药细胞的药物主动外排与凋亡的影响。结果:1.与亲本细胞SGC7901相比,DJ-1在胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR中的蛋白表达和m RNA表达分别上调236%和262%。2.DJ-1高表达的胃癌稳转细胞株SGC7901/LV-DJ-1中DJ-1蛋白与m RNA表达较其亲本细胞SGC7901分别上调76%和87%;DJ-1低表达的胃癌多药耐药稳转株细胞SGC7901/VCR/sh DJ-1中DJ-1蛋白与m RNA表达较其对照的胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR分别下调64%和71%;提示DJ-1高表达的SGC7901/LV-DJ-1和DJ-1低表达的SGC7901/VCR/sh DJ-1稳转细胞株构建成功。3.经VCR、ADR、5-FU和DDP四种化疗药物处理后,DJ-1过表达胃癌细胞SGC7901/LV-DJ-1与其亲本细胞相比较,细胞存活率提高、对化疗药物IC₅₀浓度提高、细胞形成克隆数目增多且细胞周期G₀/G₁期细胞比例下降;DJ-1低表达的胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR/sh DJ-1与胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR相比较,其细胞存活率降低、对化疗药物IC₅₀浓度降低、细胞形成克隆数目显著减少,同时细胞周期G₀/G₁期百分比升高。4.DJ-1过表达胃癌细胞SGC7901/LV-DJ-1与其亲本细胞相比较,其对阿霉素的药物泵出率明显增高,经化疗药物处理后的细胞凋亡百分比下降;DJ-1低表达的胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR/sh DJ-1与胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR相比较,其对阿霉素的药物泵出率降低且经化疗药物处理后的细胞凋亡百分比升高。结论:相比亲本胃癌细胞SGC7901,DJ-1在VCR诱导的胃癌多药耐药细胞SGC7901/中过表达,且DJ-1参与了胃癌细胞多药耐药性的诱发过程,其机制可能与DJ-1促进胃癌多药耐药细胞的药物主动外排和抑制细胞凋亡有关。